Puesta a punto de un método de RT-PCR en tiempo real para la detección de Virus Sincicial Respiratorio (VSR) y comparación con métodos de rutina en el laboratorio bioquímico /

La infección respiratoria aguda (IRA) producida por VSR es una de las principales causas de hospitalizaciones de lactantes y niños (Borchers, A. T., et al.,2013)y de una elevada morbilidad y mortalidad entre ancianos y adultos con condiciones debilitantes subyacentes. El diagnóstico preciso y rápido...

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Detalles Bibliográficos
Autores principales: 17359 Herasimiuk, Melisa Anabel, 17367 Díaz, Rosa Viviana Directora, 17368 Castello, Alejandro Codirector
Formato: text
Lenguaje:Español
Publicado: Florencio Varela : Universidad Nacional Arturo Jauretche, 2023
Materias:
Bioquímica
VIRUS SINCITIALES RESPIRATORIOS
RT-qPCR
TÉCNICA DEL ANTICUERPO FLUORESCENTE DIRECTA
INMUNOFLUORESCENCIA DIRECTA
IFD
LAMP
Acceso en línea:https://biblioarchivo.unaj.edu.ar/mostrar/pdf/scvsdf/erwe/b38a4c5ddf9753a093eda63b16219be22012d906
Aporte de:
Repositorio UNAJ de Universidad Nacional Arturo Jauretche
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description La infección respiratoria aguda (IRA) producida por VSR es una de las principales causas de hospitalizaciones de lactantes y niños (Borchers, A. T., et al.,2013)y de una elevada morbilidad y mortalidad entre ancianos y adultos con condiciones debilitantes subyacentes. El diagnóstico preciso y rápido disminuye el uso innecesario de antibióticos y pruebas adicionales de laboratorio, el tiempo de hospitalización y la transmisión intrahospitalaria. La PCR en tiempo real es una metodología adecuada para su utilización en el laboratorio bioquímico por su velocidad, sensibilidad y la posibilidad de multiplexado, es decir la detección de cuatro o cinco patógenos simultáneamente (dependiendo de la cantidad de canales del instrumento usado). Objetivos: Puesta a punto de una RT-qPCR capaz de detectar VSR sobre el material de referencia.Materiales y métodos: Se utilizó el kit QIAprep&amp Viral RNA UM, Qiagen diseñado para detección de SARS-Cov-2 y otros patógenos respiratorios que realizan la RT y la PCR subsiguiente en forma directa y en un solo tubo. La reacción y detección del virus se realizó con un equipo CFX96 Touch Real-Time PCR Detection System (BioRad Laboratories) utilizando el canal de FAM para el VSR, el de HEX para el control endógeno y el de Cy5 para el control interno (control exógeno). Los resultados se analizaron con el Software Maestro (CFX Maestro Software, BioRad Laboratories). Conclusiones:Fue posible poner a punto una técnica de detección por RT-qPCR para virus sincitial respiratorio humano que resultó comparable en cuanto a su capacidad de detección a las técnicas de rutina de inmunofluorescencia directa (IFD) y amplificación isotérmica LAMP (IDNOW RSV de Abbot). Sin embargo, para los laboratorios equipados y que puedan montar esta metodología, la RT-qPCR tiene grandes ventajas dado que puede detectar presencia de virus donde LAMP o IFD no pueden, es más versátil y económica, permite la opción de multiplexado, el procesamiento de muchas más muestras por hora y la posibilidad de modificación por el operador.
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