Evaluación de la tolerancia al estrés salino mediante la transformación genética de lotus tenuis con el gen que codifica para un transportador Na+/H+
El estrés salino es uno de los principales estreses abióticos que afectan seriamente el crecimiento y rendimiento de los cultivos. Una de las estrategias de las plantas para mitigar los daños producidos por tal estrés es evitar la toxicidad iónica mediante la compartimentalización del Na+ en vacuola...
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| Autor principal: | |
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| Otros Autores: | |
| Formato: | Trabajo final de grado |
| Lenguaje: | Español |
| Publicado: |
Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Agrarias
2025
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| Materias: | |
| Acceso en línea: | http://repositorio.unne.edu.ar/handle/123456789/58577 |
| Aporte de: |
| Sumario: | El estrés salino es uno de los principales estreses abióticos que afectan seriamente el
crecimiento y rendimiento de los cultivos. Una de las estrategias de las plantas para
mitigar los daños producidos por tal estrés es evitar la toxicidad iónica mediante la
compartimentalización del Na+ en vacuolas, acumulando dicho ion en las mismas y
favoreciendo una adecuada relación Na+/K+ en el citosol de las células. Dicho
mecanismo se logra a través de anti-transportadores Na+/H+ del tipo NHX localizados
en el tonoplasto (clase I) o en las membranas endosomales (clase II). Con el propósito
de determinar la localización subcelular del anti-transportador de iones NHX1 de Lotus
tenuis, se procedió a la modificación genética de plantas de la especie en estudio con el
gen que codifica para la enzima NHX1 de L. tenuis y el gen que codifica para la
proteína verde fluorescente (GFP), mediante el protocolo de transformación indirecto
con cepas de Agrobacterium tumefaciens conteniendo el vector binario
pCaMV35S:NHX1:GFP y el gen bar como marcador selectivo. La metodología
consisitió en inocular los segmentos foliares con la suspensión de A. tumefaciens.
Seguidamente, los explantes transformados fueron seleccionados con glufosinato de
amonio e incubados en condiciones de luz y temperatura controladas. Las plantas
resistentes a glufosinato fueron analizadas mediante amplificación (PCR), utilizando
oligonucleótidos específicos para el gen gfp. Como resultado se obtuvieron 5 líneas
transgénicas de 28 plantas analizadas. Posteriormente, las hojas de las plantas
transformadas genéticamente fueron plasmolizadas y observadas en un microscopio
confocal, permitiendo localizar a la proteína en la membrana vacuolar, hebras
transvacuolares y estructuras esféricas denominadas bulbs, sugiriendo que el anti-
transportador NHX1 de L. tenuis pertenece a la clase I de la familia de los NHX,
favoreciendo la compartimentalización de Na+ dentro de la vacuola, aliviando la
toxicidad iónica. |
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