Evaluación de la tolerancia al estrés salino mediante la transformación genética de lotus tenuis con el gen que codifica para un transportador Na+/H+
El estrés salino es uno de los principales estreses abióticos que afectan seriamente el crecimiento y rendimiento de los cultivos. Una de las estrategias de las plantas para mitigar los daños producidos por tal estrés es evitar la toxicidad iónica mediante la compartimentalización del Na+ en vacuola...
Guardado en:
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| Otros Autores: | |
| Formato: | Trabajo final de grado |
| Lenguaje: | Español |
| Publicado: |
Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Agrarias
2025
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| Acceso en línea: | http://repositorio.unne.edu.ar/handle/123456789/58577 |
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I48-R184-123456789-585772025-08-28T14:33:14Z Evaluación de la tolerancia al estrés salino mediante la transformación genética de lotus tenuis con el gen que codifica para un transportador Na+/H+ Álvarez, Mayra Yanet Espasandin, Fabiana Daniela Estrés salino Transformación genética Lotus tenuis Transportador Na+/H+ El estrés salino es uno de los principales estreses abióticos que afectan seriamente el crecimiento y rendimiento de los cultivos. Una de las estrategias de las plantas para mitigar los daños producidos por tal estrés es evitar la toxicidad iónica mediante la compartimentalización del Na+ en vacuolas, acumulando dicho ion en las mismas y favoreciendo una adecuada relación Na+/K+ en el citosol de las células. Dicho mecanismo se logra a través de anti-transportadores Na+/H+ del tipo NHX localizados en el tonoplasto (clase I) o en las membranas endosomales (clase II). Con el propósito de determinar la localización subcelular del anti-transportador de iones NHX1 de Lotus tenuis, se procedió a la modificación genética de plantas de la especie en estudio con el gen que codifica para la enzima NHX1 de L. tenuis y el gen que codifica para la proteína verde fluorescente (GFP), mediante el protocolo de transformación indirecto con cepas de Agrobacterium tumefaciens conteniendo el vector binario pCaMV35S:NHX1:GFP y el gen bar como marcador selectivo. La metodología consisitió en inocular los segmentos foliares con la suspensión de A. tumefaciens. Seguidamente, los explantes transformados fueron seleccionados con glufosinato de amonio e incubados en condiciones de luz y temperatura controladas. Las plantas resistentes a glufosinato fueron analizadas mediante amplificación (PCR), utilizando oligonucleótidos específicos para el gen gfp. Como resultado se obtuvieron 5 líneas transgénicas de 28 plantas analizadas. Posteriormente, las hojas de las plantas transformadas genéticamente fueron plasmolizadas y observadas en un microscopio confocal, permitiendo localizar a la proteína en la membrana vacuolar, hebras transvacuolares y estructuras esféricas denominadas bulbs, sugiriendo que el anti- transportador NHX1 de L. tenuis pertenece a la clase I de la familia de los NHX, favoreciendo la compartimentalización de Na+ dentro de la vacuola, aliviando la toxicidad iónica. 2025-08-28T13:43:04Z 2025-08-28T13:43:04Z 2019 Trabajo final de grado Álvarez, Mayra Yanet, 2019. Evaluación de la tolerancia al estrés salino mediante la transformación genética de lotus tenuis con el gen que codifica para un transportador Na+/H+. Trabajo final de grado. Corrientes: Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Agrarias. http://repositorio.unne.edu.ar/handle/123456789/58577 spa openAccess http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/2.5/ar/ application/pdf 19 p. application/pdf Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Agrarias |
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El estrés salino es uno de los principales estreses abióticos que afectan seriamente el
crecimiento y rendimiento de los cultivos. Una de las estrategias de las plantas para
mitigar los daños producidos por tal estrés es evitar la toxicidad iónica mediante la
compartimentalización del Na+ en vacuolas, acumulando dicho ion en las mismas y
favoreciendo una adecuada relación Na+/K+ en el citosol de las células. Dicho
mecanismo se logra a través de anti-transportadores Na+/H+ del tipo NHX localizados
en el tonoplasto (clase I) o en las membranas endosomales (clase II). Con el propósito
de determinar la localización subcelular del anti-transportador de iones NHX1 de Lotus
tenuis, se procedió a la modificación genética de plantas de la especie en estudio con el
gen que codifica para la enzima NHX1 de L. tenuis y el gen que codifica para la
proteína verde fluorescente (GFP), mediante el protocolo de transformación indirecto
con cepas de Agrobacterium tumefaciens conteniendo el vector binario
pCaMV35S:NHX1:GFP y el gen bar como marcador selectivo. La metodología
consisitió en inocular los segmentos foliares con la suspensión de A. tumefaciens.
Seguidamente, los explantes transformados fueron seleccionados con glufosinato de
amonio e incubados en condiciones de luz y temperatura controladas. Las plantas
resistentes a glufosinato fueron analizadas mediante amplificación (PCR), utilizando
oligonucleótidos específicos para el gen gfp. Como resultado se obtuvieron 5 líneas
transgénicas de 28 plantas analizadas. Posteriormente, las hojas de las plantas
transformadas genéticamente fueron plasmolizadas y observadas en un microscopio
confocal, permitiendo localizar a la proteína en la membrana vacuolar, hebras
transvacuolares y estructuras esféricas denominadas bulbs, sugiriendo que el anti-
transportador NHX1 de L. tenuis pertenece a la clase I de la familia de los NHX,
favoreciendo la compartimentalización de Na+ dentro de la vacuola, aliviando la
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