Técnica molecular para la detección de Herpesvirus en productos de aborto equino
La tasa global de pérdidas gestacionales en la población de caballos en Argentina varía de 5 a5%, dependiendo del período en que ocurra la pérdida gestacional hablamos de muerte embrionaria, aborto o mortinato. El aborto viral equino o rinoneumonitis equina, es una de las enfermedades de distribu...
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| Autores principales: | , , , , , |
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| Formato: | Reunión |
| Lenguaje: | Español |
| Publicado: |
Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Veterinarias
2024
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| Materias: | |
| Acceso en línea: | http://repositorio.unne.edu.ar/handle/123456789/55861 |
| Aporte de: |
| Sumario: | La tasa global de pérdidas gestacionales en la población de caballos en Argentina varía
de 5 a5%, dependiendo del período en que ocurra la pérdida gestacional hablamos de
muerte embrionaria, aborto o mortinato. El aborto viral equino o rinoneumonitis
equina, es una de las enfermedades de distribución mundial más graves que pueden
padecer los equinos; la enfermedad es causada por los Herpesvirus equinos tipos y
(HVE-y HVE-). Ambos virus son potenciales factores de riesgo de enfermedad para
caballos de todas las edades y categorías, especialmente para los potros. HVE se
disemina rápidamente y requiere intervención inmediata. La identificación temprana
del agente es necesaria para la rápida ejecución de medidas de control apropiadas,
prevenir o detener un brote, e implementar un tratamiento del caballo infestado para
reducir la posibilidad de complicaciones causadas por infecciones secundarias. El
objetivo del trabajo es la detección de genoma de herpes virus equino utilizando la
reacción en cadena de la polimerasa seminested (PCRsn). Se procesaron8 muestras
correspondientes a0 casos clínicos, 6 de las cuales fueron tejidos fetales (placenta,
riñón, hígado y pulmón) y muestras de hisopado de útero, utilizados para la extracción
de ADN. Dos reacciones de amplificación sucesivas fueron llevadas a cabo en un
volumen final de5μl y conteniendo:X de Buffer de PCR,,5mM MgCl,,0μM de cada
oligonucleótido cebador (HVE-Fw/ HVE-Rew para la primer ronda de amplificación y
HVE-Fw/ HVE-Rn para la segunda ronda de amplificación); 00μM de una mezcla
equimolecular de dNTPs, 0,5U de Taq ADN polimerasa. Se utilizó un control positivo de
PCR consistentes en ADN de HVE-cedidos gentilmente por el Instituto de Virología
Equina del INTA Castelar y un control negativo consistente en agua destilada. Las
condiciones térmicas para la amplificación fueron: desnaturalización inicial: 95°C por
5min, luego5 ciclos de desnaturalización a 95°C por0seg; pegado de primer: 60°C por
0seg; extensión: 7°C por 60seg; extensión final: 7°C pormin; incubación: oC hasta
su utilización. Los tamaños de los productos de amplificación de la primera y segunda
ronda fueron fragmentos de 509 ypb, éstos fueron separados y visualizados por
electroforesis en gel de agarosa%, teñidos con bromuro de etidio y observados por
transiluminación UV. Como resultado obtuvimos casos clínicos detectables para HVE-
, uno para las muestras de riñón e hígado y el otro solo en hígado, ambos casos
mostraron bandas de amplificación específica luego de realizar la segunda ronda de
amplificación. Este estudio demuestra la ventaja del uso de Nested PCR en cuanto a la
sensibilidad, ya que se utiliza una porción más pequeña de la muestra para obtener una
amplificación específica y eficiente. |
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