Optimización de condiciones experimentales para la identificación de L. chagasi analizando diferentes secuencias del genoma

La leishmaniasis visceral es una zoonosis grave causada por Leishmania donovani y Leishmania infantun/chagasi, para la cual los perros infectados son el principal reservorio. Con el objetivo de disponer de métodos específicos para la identificación del genoma de Leishmania chagasi en muestras de can...

Descripción completa

Guardado en:
Detalles Bibliográficos
Autores principales: De Biasio, María Bárbara, Esquivel, Graciela Patricia, Vega, Lucas, Jastrzebski, Fernando Alberto, Almirón, Enrique Celso
Formato: Reunión
Lenguaje:Español
Publicado: Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Veterinarias 2024
Materias:
PCR
Acceso en línea:http://repositorio.unne.edu.ar/handle/123456789/55077
Aporte de:
id I48-R184-123456789-55077
record_format dspace
spelling I48-R184-123456789-550772024-10-23T11:13:57Z Optimización de condiciones experimentales para la identificación de L. chagasi analizando diferentes secuencias del genoma De Biasio, María Bárbara Esquivel, Graciela Patricia Vega, Lucas Jastrzebski, Fernando Alberto Almirón, Enrique Celso PCR Zoonosis Visceral La leishmaniasis visceral es una zoonosis grave causada por Leishmania donovani y Leishmania infantun/chagasi, para la cual los perros infectados son el principal reservorio. Con el objetivo de disponer de métodos específicos para la identificación del genoma de Leishmania chagasi en muestras de caninos se optimizaron las condiciones químicas y térmicas para la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) con la cual se amplificaron dos fragmentos diferentes de Leishmania chagasi. Las reacciones fueron PCR sencillas llevadas a cabo con un volumen final de 25ul y contuvieron 1X de Buffer de PCR, 0,2gM de cada oligonucleótido cebador (RV1/RV2 o LCS1/LCS3); 0,2mM de una mezcla equimolecular de dNTPs, 1U de Taq ADN polimerasa y 1,5 o 2,0mM MgCl2, según se utilicen los pares de primers RV1/RV2 dirigidos a una secuencia de ADN altamente repetitiva del ADN kinetoplastidico o LCS1/LCS3 dirigidos a genes de ARNr18S. En todos los casos se incorporaron controles positivos cedidos gentilmente por el Instituto Nacional de Parasitología "Dr. Mario Fatala Chaben” y controles negativos consistentes en agua destilada. Las condiciones térmicas para la amplificación mediada por primers RV1/RV2 fueron: desnaturalización inicial: 94°C por 5min, luego 35 ciclos de desnaturalización a 94°C por 60seg; pegado de primer: 59°C por 60seg; extensión: 72°C por 60seg; extensión final: 72°C por 5min; incubación: 4°C hasta su utilización. Las condiciones térmicas para la amplificación mediada por primers LCS1/LCS3 fueron: desnaturalización inicial: 94°C por 2min, luego 40 ciclos de desnaturalización a 94°C por 30seg; pegado de primer: 55°C por 30seg; extensión: 72°C por 60seg; extensión final: 72°C por 2min; incubación: 4°C hasta su utilización Los productos de amplificación de ambas reacciones fueron fragmentos de 145pb y 259pb respectivamente. Éstos fueron separados y visualizados por electroforesis en gel de agarosa 2%, teñidos con bromuro de etidio y observados por transiluminación UV. Dada la elevada sensibilidad y especificidad de los métodos moleculares, cuando fueron aplicados a muestras de control positivos ambas dieron bandas de amplificación detectables del tamaño esperado, no observándose bandas en muestras de ADN control correspondientes a Leishmanias braziliensis. 2024-09-03T16:07:17Z 2024-09-03T16:07:17Z 2021-11-25 Reunión De Biasio, María Bárbara et al., 2021. Optimización de condiciones experimentales para la identificación de L. chagasi analizando diferentes secuencias del genoma. En: XLI Sesión de Comunicaciones Científicas. Corrientes: Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Veterinarias, p. 10-10. 2451-6732 http://repositorio.unne.edu.ar/handle/123456789/55077 spa openAccess http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/2.5/ar/ application/pdf p. 10-10 application/pdf Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Veterinarias
institution Universidad Nacional del Nordeste
institution_str I-48
repository_str R-184
collection RIUNNE - Repositorio Institucional de la Universidad Nacional del Nordeste (UNNE)
language Español
topic PCR
Zoonosis
Visceral
spellingShingle PCR
Zoonosis
Visceral
De Biasio, María Bárbara
Esquivel, Graciela Patricia
Vega, Lucas
Jastrzebski, Fernando Alberto
Almirón, Enrique Celso
Optimización de condiciones experimentales para la identificación de L. chagasi analizando diferentes secuencias del genoma
topic_facet PCR
Zoonosis
Visceral
description La leishmaniasis visceral es una zoonosis grave causada por Leishmania donovani y Leishmania infantun/chagasi, para la cual los perros infectados son el principal reservorio. Con el objetivo de disponer de métodos específicos para la identificación del genoma de Leishmania chagasi en muestras de caninos se optimizaron las condiciones químicas y térmicas para la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) con la cual se amplificaron dos fragmentos diferentes de Leishmania chagasi. Las reacciones fueron PCR sencillas llevadas a cabo con un volumen final de 25ul y contuvieron 1X de Buffer de PCR, 0,2gM de cada oligonucleótido cebador (RV1/RV2 o LCS1/LCS3); 0,2mM de una mezcla equimolecular de dNTPs, 1U de Taq ADN polimerasa y 1,5 o 2,0mM MgCl2, según se utilicen los pares de primers RV1/RV2 dirigidos a una secuencia de ADN altamente repetitiva del ADN kinetoplastidico o LCS1/LCS3 dirigidos a genes de ARNr18S. En todos los casos se incorporaron controles positivos cedidos gentilmente por el Instituto Nacional de Parasitología "Dr. Mario Fatala Chaben” y controles negativos consistentes en agua destilada. Las condiciones térmicas para la amplificación mediada por primers RV1/RV2 fueron: desnaturalización inicial: 94°C por 5min, luego 35 ciclos de desnaturalización a 94°C por 60seg; pegado de primer: 59°C por 60seg; extensión: 72°C por 60seg; extensión final: 72°C por 5min; incubación: 4°C hasta su utilización. Las condiciones térmicas para la amplificación mediada por primers LCS1/LCS3 fueron: desnaturalización inicial: 94°C por 2min, luego 40 ciclos de desnaturalización a 94°C por 30seg; pegado de primer: 55°C por 30seg; extensión: 72°C por 60seg; extensión final: 72°C por 2min; incubación: 4°C hasta su utilización Los productos de amplificación de ambas reacciones fueron fragmentos de 145pb y 259pb respectivamente. Éstos fueron separados y visualizados por electroforesis en gel de agarosa 2%, teñidos con bromuro de etidio y observados por transiluminación UV. Dada la elevada sensibilidad y especificidad de los métodos moleculares, cuando fueron aplicados a muestras de control positivos ambas dieron bandas de amplificación detectables del tamaño esperado, no observándose bandas en muestras de ADN control correspondientes a Leishmanias braziliensis.
format Reunión
author De Biasio, María Bárbara
Esquivel, Graciela Patricia
Vega, Lucas
Jastrzebski, Fernando Alberto
Almirón, Enrique Celso
author_facet De Biasio, María Bárbara
Esquivel, Graciela Patricia
Vega, Lucas
Jastrzebski, Fernando Alberto
Almirón, Enrique Celso
author_sort De Biasio, María Bárbara
title Optimización de condiciones experimentales para la identificación de L. chagasi analizando diferentes secuencias del genoma
title_short Optimización de condiciones experimentales para la identificación de L. chagasi analizando diferentes secuencias del genoma
title_full Optimización de condiciones experimentales para la identificación de L. chagasi analizando diferentes secuencias del genoma
title_fullStr Optimización de condiciones experimentales para la identificación de L. chagasi analizando diferentes secuencias del genoma
title_full_unstemmed Optimización de condiciones experimentales para la identificación de L. chagasi analizando diferentes secuencias del genoma
title_sort optimización de condiciones experimentales para la identificación de l. chagasi analizando diferentes secuencias del genoma
publisher Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Veterinarias
publishDate 2024
url http://repositorio.unne.edu.ar/handle/123456789/55077
work_keys_str_mv AT debiasiomariabarbara optimizaciondecondicionesexperimentalesparalaidentificaciondelchagasianalizandodiferentessecuenciasdelgenoma
AT esquivelgracielapatricia optimizaciondecondicionesexperimentalesparalaidentificaciondelchagasianalizandodiferentessecuenciasdelgenoma
AT vegalucas optimizaciondecondicionesexperimentalesparalaidentificaciondelchagasianalizandodiferentessecuenciasdelgenoma
AT jastrzebskifernandoalberto optimizaciondecondicionesexperimentalesparalaidentificaciondelchagasianalizandodiferentessecuenciasdelgenoma
AT almironenriquecelso optimizaciondecondicionesexperimentalesparalaidentificaciondelchagasianalizandodiferentessecuenciasdelgenoma
_version_ 1832345732076535808