Optimización de condiciones de amplificación para la identificación de aves y felinos por PCR

Entre múltiples aplicaciones, las técnicas genéticas han demostrado ser de gran utilidad para resolver la identificación de los individuos y para la determinación de la especie a la que pertenecen. Se ha probado que es posible extraer ADN de alimentos procesados, pudiendo identificarse sus component...

Descripción completa

Guardado en:
Detalles Bibliográficos
Autores principales: Sosa, Fabiana Evangelina, Sandoval, Gladis Lilia, De Biasio, María Bárbara
Formato: Reunión
Lenguaje:Español
Publicado: Universidad Nacional del Nordeste. Secretaría General de Ciencia y Técnica 2024
Materias:
ADN
Acceso en línea:http://repositorio.unne.edu.ar/handle/123456789/54485
Aporte de:
id I48-R184-123456789-54485
record_format dspace
spelling I48-R184-123456789-544852024-10-23T11:15:53Z Optimización de condiciones de amplificación para la identificación de aves y felinos por PCR Sosa, Fabiana Evangelina Sandoval, Gladis Lilia De Biasio, María Bárbara ADN Calidad alimentaria Biología molecular Entre múltiples aplicaciones, las técnicas genéticas han demostrado ser de gran utilidad para resolver la identificación de los individuos y para la determinación de la especie a la que pertenecen. Se ha probado que es posible extraer ADN de alimentos procesados, pudiendo identificarse sus componentes, evitando así el reemplazo de una materia prima por otra. Con el objeto de contribuir con la resolución de situaciones problemáticas vinculadas a la identificación de especies animales relacionada a calidad alimentaria, sanidad y producción animal, aspectos bromatológicos y salud pública, se realizó la extracción de muestras de células bucales en dos pollos por medio de hisopos, rotando los mismos en la cavidad bucal durante un lapso de tiempo de entre 7-10 segundos. Los hisopos obtenidos se conservaron en tubos Eppendorf a -20°C para su posterior uso. Asimismo, se extrajo sangre a una gata utilizando EDTA (ácido etilenaminotetracético) como anticoagulante y se conservó la muestra -20°C hasta su utilización. Se extrajo ADN de las muestras, utilizando el detergente CTAB (Bromuro de cetil trimetilamonio) para la digestión celular. Previo a la incubación con detergente, se provocó lisis osmótica de los glóbulos rojos en la muestra de sangre. Se purificaron los ácidos nucleicos por incubación con cloroformo:alcohol isoamílico y posterior precipitación con isopropanol. El precipitado se lavó con etanol 70%, resuspendiéndolo luego en agua destilada y conservándose a -20° C hasta su utilización. Los productos de PCR fueron separados en geles de agarosa 2% utilizando buffer TBE 1x y conteniendo bromuro de etidio. La visualización se realizó por transiluminación UV. Tanto para el caso de aves como felinos las condiciones con las que se obtuvieron los mejores resultados (bandas electroforéticas nítidas y de buena intensidad) fueron las reacciones de PCR de 25pl de volumen final conteniendo agua, Buffer de PCR (Promega) 1 x, MgCI2 1,5mM, dNTPs (Promega) 0,2 mM, Primers Fw y Rew 0,2 pM de cada uno y 1U de Go-Taq (Promega). Las condiciones térmicas resultaron en: desnaturalización inicial a 95°C durante 1 minuto seguido de 30 ciclos consistentes en desnaturalización a 95°C 30”, annealing de primers a 55°C 30” y extensión a 72°C 30” y luego una extensión final a 72°C 5 minutos e incubación a 4°C. En el revelado se observaron bandas de amplificación específicas de 197 y 98pb para aves y felinos respectivamente. Se logró así, poner a punto dos PCR para la detección de especies animales utilizando los oligonucleótidos cebadores descritos por Walker J.A.ef al. (2004), en hisopado de cavidad bucofaríngea de pollos parhileras y en sangre de gato doméstico, en el SVBM-FCV-UNNE, quedando disponibles para ser utilizadas en proyectos de investigación o en muestras que arriben a dicho Servicio. 2024-07-10T15:19:40Z 2024-07-10T15:19:40Z 2015-06-03 Reunión Sosa, Fabiana Evangelina, Sandoval, Gladis Lilia y De Biasio, María Bárbara, 2015. Optimización de condiciones de amplificación para la identificación de aves y felinos por PCR. En: XXI Reunión de Comunicaciones Científicas y Tecnológicas -Edición 2015. Resistencia: Universidad Nacional del Nordeste. Secretaría General de Ciencia y Técnica, p. 1-1. http://repositorio.unne.edu.ar/handle/123456789/54485 spa UNNE-Pregrado/ Res.994/14CS/AR. Corrientes/Implementación de técnicas moleculares para la identificación de especies animales openAccess http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/2.5/ar/ application/pdf p. 1-1 application/pdf Universidad Nacional del Nordeste. Secretaría General de Ciencia y Técnica
institution Universidad Nacional del Nordeste
institution_str I-48
repository_str R-184
collection RIUNNE - Repositorio Institucional de la Universidad Nacional del Nordeste (UNNE)
language Español
topic ADN
Calidad alimentaria
Biología molecular
spellingShingle ADN
Calidad alimentaria
Biología molecular
Sosa, Fabiana Evangelina
Sandoval, Gladis Lilia
De Biasio, María Bárbara
Optimización de condiciones de amplificación para la identificación de aves y felinos por PCR
topic_facet ADN
Calidad alimentaria
Biología molecular
description Entre múltiples aplicaciones, las técnicas genéticas han demostrado ser de gran utilidad para resolver la identificación de los individuos y para la determinación de la especie a la que pertenecen. Se ha probado que es posible extraer ADN de alimentos procesados, pudiendo identificarse sus componentes, evitando así el reemplazo de una materia prima por otra. Con el objeto de contribuir con la resolución de situaciones problemáticas vinculadas a la identificación de especies animales relacionada a calidad alimentaria, sanidad y producción animal, aspectos bromatológicos y salud pública, se realizó la extracción de muestras de células bucales en dos pollos por medio de hisopos, rotando los mismos en la cavidad bucal durante un lapso de tiempo de entre 7-10 segundos. Los hisopos obtenidos se conservaron en tubos Eppendorf a -20°C para su posterior uso. Asimismo, se extrajo sangre a una gata utilizando EDTA (ácido etilenaminotetracético) como anticoagulante y se conservó la muestra -20°C hasta su utilización. Se extrajo ADN de las muestras, utilizando el detergente CTAB (Bromuro de cetil trimetilamonio) para la digestión celular. Previo a la incubación con detergente, se provocó lisis osmótica de los glóbulos rojos en la muestra de sangre. Se purificaron los ácidos nucleicos por incubación con cloroformo:alcohol isoamílico y posterior precipitación con isopropanol. El precipitado se lavó con etanol 70%, resuspendiéndolo luego en agua destilada y conservándose a -20° C hasta su utilización. Los productos de PCR fueron separados en geles de agarosa 2% utilizando buffer TBE 1x y conteniendo bromuro de etidio. La visualización se realizó por transiluminación UV. Tanto para el caso de aves como felinos las condiciones con las que se obtuvieron los mejores resultados (bandas electroforéticas nítidas y de buena intensidad) fueron las reacciones de PCR de 25pl de volumen final conteniendo agua, Buffer de PCR (Promega) 1 x, MgCI2 1,5mM, dNTPs (Promega) 0,2 mM, Primers Fw y Rew 0,2 pM de cada uno y 1U de Go-Taq (Promega). Las condiciones térmicas resultaron en: desnaturalización inicial a 95°C durante 1 minuto seguido de 30 ciclos consistentes en desnaturalización a 95°C 30”, annealing de primers a 55°C 30” y extensión a 72°C 30” y luego una extensión final a 72°C 5 minutos e incubación a 4°C. En el revelado se observaron bandas de amplificación específicas de 197 y 98pb para aves y felinos respectivamente. Se logró así, poner a punto dos PCR para la detección de especies animales utilizando los oligonucleótidos cebadores descritos por Walker J.A.ef al. (2004), en hisopado de cavidad bucofaríngea de pollos parhileras y en sangre de gato doméstico, en el SVBM-FCV-UNNE, quedando disponibles para ser utilizadas en proyectos de investigación o en muestras que arriben a dicho Servicio.
format Reunión
author Sosa, Fabiana Evangelina
Sandoval, Gladis Lilia
De Biasio, María Bárbara
author_facet Sosa, Fabiana Evangelina
Sandoval, Gladis Lilia
De Biasio, María Bárbara
author_sort Sosa, Fabiana Evangelina
title Optimización de condiciones de amplificación para la identificación de aves y felinos por PCR
title_short Optimización de condiciones de amplificación para la identificación de aves y felinos por PCR
title_full Optimización de condiciones de amplificación para la identificación de aves y felinos por PCR
title_fullStr Optimización de condiciones de amplificación para la identificación de aves y felinos por PCR
title_full_unstemmed Optimización de condiciones de amplificación para la identificación de aves y felinos por PCR
title_sort optimización de condiciones de amplificación para la identificación de aves y felinos por pcr
publisher Universidad Nacional del Nordeste. Secretaría General de Ciencia y Técnica
publishDate 2024
url http://repositorio.unne.edu.ar/handle/123456789/54485
work_keys_str_mv AT sosafabianaevangelina optimizaciondecondicionesdeamplificacionparalaidentificaciondeavesyfelinosporpcr
AT sandovalgladislilia optimizaciondecondicionesdeamplificacionparalaidentificaciondeavesyfelinosporpcr
AT debiasiomariabarbara optimizaciondecondicionesdeamplificacionparalaidentificaciondeavesyfelinosporpcr
_version_ 1832345815318790144