Adaptación del método de difusión en gel para la detección de pepsina gástrica de pacú (Piaractus mesopotamicus holmberg, 1887)

La piscicultura ha despertado interés a nivel mundial desde hace más de 30 años. En la región NEA esta actividad ha venido incrementándose en los últimos años con especies nativas como el pacú (Piaractus mesopotamicus Holmberg, 1887). El procesamiento del pescado genera una gran cantidad de residu...

Descripción completa

Guardado en:
Detalles Bibliográficos
Autor principal: Bustillo, Soledad
Formato: Documento de conferencia
Lenguaje:Español
Publicado: Universidad Nacional del Nordeste. Secretaria General de Ciencia y Técnica 2023
Materias:
Pacú
Pepsina
Extractos gástricos
Piaractus mesopotamicus
Acceso en línea:http://repositorio.unne.edu.ar/handle/123456789/52655
Aporte de:
RIUNNE - Repositorio Institucional de la Universidad Nacional del Nordeste (UNNE) de Universidad Nacional del Nordeste
id I48-R184-123456789-52655
record_format dspace
spelling I48-R184-123456789-526552024-10-23T10:57:43Z Adaptación del método de difusión en gel para la detección de pepsina gástrica de pacú (Piaractus mesopotamicus holmberg, 1887) Bustillo, Soledad Pacú Pepsina Extractos gástricos Piaractus mesopotamicus La piscicultura ha despertado interés a nivel mundial desde hace más de 30 años. En la región NEA esta actividad ha venido incrementándose en los últimos años con especies nativas como el pacú (Piaractus mesopotamicus Holmberg, 1887). El procesamiento del pescado genera una gran cantidad de residuos, en su mayoría vísceras, que son una fuente potencial de enzimas digestivas como la pepsina, proteasa que posee aplicabilidad en la industria y un gran valor de comercialización. El objetivo de este trabajo fue la optimización de un método sencillo para la detección y semi-cuantificación de pepsina en extractos obtenidos a partir de mucosa gástrica de pacú. Los ejemplares fueron proporcionados por la Estancia “La Elina” (Riachuelo, Corrientes). La preparación de los extractos gástricos se realizó a partir de la digestión mecánica y sonicado de la mucosa de los estómagos del pacú en buffer Tris pH 2. Luego de centrifugar 5 min a 10000 rpm, se recogió el sobrenadante y se conservó a -20°C hasta la ejecución de los ensayos. La semi-cuantificación del contenido de pepsina se realizó empleando geles de caseína-agar. Brevemente, se prepararon dos soluciones, una en la que se disolvió el agar agar (1.5% P/V) en agua destilada y otra de caseína (13g leche Svelty Nestlé/100mL buffer Tris) disuelta en buffer glicina-HCl pH2 (1:4) a 37oC. Los geles de 5mm de espesor se prepararon mezclando partes iguales de ambas soluciones, se los dejó enfriar y se efectuaron los pocillos de 4mm de diámetro. Se sembraron 15 μL de las muestras a ensayar y se midió el halo de lisis luego de 24h a 37oC. En primer lugar se realizó una curva de calibración utilizando pepsina porcina comercial como patrón (0.1-3mg/mL, Sigma-Aldrich). Se graficó el diámetro de los halos en función del log2 de las concentraciones para su linealización. Esto permitió luego poder calcular las concentraciones de pepsina presentes en las soluciones de extracto ensayadas (extracto puro y diluciones hasta 1/8) a través de los halos exhibidos a las 24h (Tabla 1 y Fig. 2). Por último, se pudo determinar gráficamente la sensibilidad de este método, es decir la mínima concentración de enzima detectable: 5x10-5 mg/mL. Así, este método sencillo permitirá determinar la presencia de pepsina y su semi cuantificación 2023-10-03T20:32:00Z 2023-10-03T20:32:00Z 2017 Documento de conferencia Bustillo, Soledad, 2017. Adaptación del método de difusión en gel para la detección de pepsina gástrica de pacú (Piaractus mesopotamicus holmberg, 1887). En: XXIII Reunión de Comunicaciones Científicas y Tecnológicas Edición 2017. Corrientes: Universidad Nacional del Nordeste. Secretaría General de Ciencia y Técnica, p. 1-1. http://repositorio.unne.edu.ar/handle/123456789/52655 spa UNNE/Evc - Cin/14F010/AR. Corrientes/Proteasas digestivas de Piaractus mesopotamicus (pacú). Su aislamiento y caracterización. openAccess http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/2.5/ar/ application/pdf p. 1-1 application/pdf Universidad Nacional del Nordeste. Secretaria General de Ciencia y Técnica
institution Universidad Nacional del Nordeste
institution_str I-48
repository_str R-184
collection RIUNNE - Repositorio Institucional de la Universidad Nacional del Nordeste (UNNE)
language Español
topic Pacú
Pepsina
Extractos gástricos
Piaractus mesopotamicus
spellingShingle Pacú
Pepsina
Extractos gástricos
Piaractus mesopotamicus
Bustillo, Soledad
Adaptación del método de difusión en gel para la detección de pepsina gástrica de pacú (Piaractus mesopotamicus holmberg, 1887)
topic_facet Pacú
Pepsina
Extractos gástricos
Piaractus mesopotamicus
description La piscicultura ha despertado interés a nivel mundial desde hace más de 30 años. En la región NEA esta actividad ha venido incrementándose en los últimos años con especies nativas como el pacú (Piaractus mesopotamicus Holmberg, 1887). El procesamiento del pescado genera una gran cantidad de residuos, en su mayoría vísceras, que son una fuente potencial de enzimas digestivas como la pepsina, proteasa que posee aplicabilidad en la industria y un gran valor de comercialización. El objetivo de este trabajo fue la optimización de un método sencillo para la detección y semi-cuantificación de pepsina en extractos obtenidos a partir de mucosa gástrica de pacú. Los ejemplares fueron proporcionados por la Estancia “La Elina” (Riachuelo, Corrientes). La preparación de los extractos gástricos se realizó a partir de la digestión mecánica y sonicado de la mucosa de los estómagos del pacú en buffer Tris pH 2. Luego de centrifugar 5 min a 10000 rpm, se recogió el sobrenadante y se conservó a -20°C hasta la ejecución de los ensayos. La semi-cuantificación del contenido de pepsina se realizó empleando geles de caseína-agar. Brevemente, se prepararon dos soluciones, una en la que se disolvió el agar agar (1.5% P/V) en agua destilada y otra de caseína (13g leche Svelty Nestlé/100mL buffer Tris) disuelta en buffer glicina-HCl pH2 (1:4) a 37oC. Los geles de 5mm de espesor se prepararon mezclando partes iguales de ambas soluciones, se los dejó enfriar y se efectuaron los pocillos de 4mm de diámetro. Se sembraron 15 μL de las muestras a ensayar y se midió el halo de lisis luego de 24h a 37oC. En primer lugar se realizó una curva de calibración utilizando pepsina porcina comercial como patrón (0.1-3mg/mL, Sigma-Aldrich). Se graficó el diámetro de los halos en función del log2 de las concentraciones para su linealización. Esto permitió luego poder calcular las concentraciones de pepsina presentes en las soluciones de extracto ensayadas (extracto puro y diluciones hasta 1/8) a través de los halos exhibidos a las 24h (Tabla 1 y Fig. 2). Por último, se pudo determinar gráficamente la sensibilidad de este método, es decir la mínima concentración de enzima detectable: 5x10-5 mg/mL. Así, este método sencillo permitirá determinar la presencia de pepsina y su semi cuantificación
format Documento de conferencia
author Bustillo, Soledad
author_facet Bustillo, Soledad
author_sort Bustillo, Soledad
title Adaptación del método de difusión en gel para la detección de pepsina gástrica de pacú (Piaractus mesopotamicus holmberg, 1887)
title_short Adaptación del método de difusión en gel para la detección de pepsina gástrica de pacú (Piaractus mesopotamicus holmberg, 1887)
title_full Adaptación del método de difusión en gel para la detección de pepsina gástrica de pacú (Piaractus mesopotamicus holmberg, 1887)
title_fullStr Adaptación del método de difusión en gel para la detección de pepsina gástrica de pacú (Piaractus mesopotamicus holmberg, 1887)
title_full_unstemmed Adaptación del método de difusión en gel para la detección de pepsina gástrica de pacú (Piaractus mesopotamicus holmberg, 1887)
title_sort adaptación del método de difusión en gel para la detección de pepsina gástrica de pacú (piaractus mesopotamicus holmberg, 1887)
publisher Universidad Nacional del Nordeste. Secretaria General de Ciencia y Técnica
publishDate 2023
url http://repositorio.unne.edu.ar/handle/123456789/52655
work_keys_str_mv AT bustillosoledad adaptaciondelmetododedifusionengelparaladetecciondepepsinagastricadepacupiaractusmesopotamicusholmberg1887
_version_ 1832344086111059968

Ejemplares similares