Evaluación del establecimiento in vitro de clones de Grevillea robusta
La recolección de semillas de Grevillea robusta. A. Cunn. es extremadamente difícil, porque son expulsadas antes de su maduración y a su vez, ésta generalmente es irregular. Las semillas no presentan latencia, pero pierden su viabilidad rápidamente, por ello las técnicas biotecnológicas pueden jug...
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| Formato: | Reunión |
| Lenguaje: | Español |
| Publicado: |
Universidad Nacional del Nordeste. Secretaría General de Ciencia y Técnica
2023
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| Acceso en línea: | http://repositorio.unne.edu.ar/handle/123456789/51919 |
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I48-R184-123456789-519192023-08-17T21:30:19Z Evaluación del establecimiento in vitro de clones de Grevillea robusta Bogado, Facundo Ariel Sansberro, Pedro Alfonso Luna, Claudia Verónica Desinfección Fungicidas Sobrevivencia La recolección de semillas de Grevillea robusta. A. Cunn. es extremadamente difícil, porque son expulsadas antes de su maduración y a su vez, ésta generalmente es irregular. Las semillas no presentan latencia, pero pierden su viabilidad rápidamente, por ello las técnicas biotecnológicas pueden jugar un rol importante, para el suministro adecuado de vitroplantas como material de plantación. Sin embargo, para el establecimiento exitoso de una especie, se hace necesario prevenir y controlar la contaminación microbiana, ya que constituye uno de los problemas más graves en la micropropagación de especies leñosas. El objetivo de este trabajo es generar información acerca del control de la contaminación en el establecimiento in vitro de segmentos nodales de diferentes clones de G. robusta. Se utilizó como material vegetal los siguientes clones: P1-C7- C23 (origen Bella Vista). El tratamiento de desinfección del material vegetal fue un cepillado fuerte y firme con solución acuosa de NaOCl al 5 %; para luego tratar a los segmentos nodales con el fungicida Carbendazim (CBZ) en una concentración de 1,5 gr.L-1; por un tiempo de exposición de 30 minutos en agitación continua; posteriormente se los sometió a un enjuague con Etanol 70% por 1 minuto; para luego exponerlos a solución acuosa de NaOCl 25% + Tween 2 gotas durante 20 minutos; y finalmente se los enjuagó con agua estéril. Los explantes fueron cultivados individualmente en tubos de vidrio conteniendo 10 ml de medio nutritivo de Murashige y Skoog (1962) en su concentración original; y adicionado con 0,5 mg.L-1 de 6-benzylaminopurina (BA) y sacarosa 3%. El pH de la solución fue ajustado a 5.8 antes de la adición del agente gelificante (agar SIGMA® A-1296, 0.70%). Los medios de cultivo fueron esterilizados mediante exposición en autoclave (1.45 kg.cm-2) durante 20 minutos. Los tubos conteniendo un explante fueron obturados con Resinite e incubados durante 20 días en condiciones de luz (fotoperiodo 14 hs., 116 μmol m-2 s-1 luz PAR) y temperatura (27±2oC) controlados. Se cultivaron 10 explantes por tratamiento en cámara de flujo laminar, efectuándose 3 repeticiones. Los parámetros evaluados fueron: % de explantes establecidos, % de infectados, % de explantes con ennegrecimiento tisular y % de mortandad/supervivencia. Si bien en todos los clones ensayados los resultados obtenidos en los parámetros evaluados fueron aceptables, el Clon C-7 fue el que se ha destacado, con un 9,38±0,57% de infección, sin ennegrecimiento tisular evidente; un 96,93 ±0,57% de establecimiento y aproximadamente un 100% de supervivencia; por ello este clon es el que presenta mejor comportamiento para ser establecido en condiciones in vitro. Si bien son necesarios mayores estudios, de forma preliminar se ha encontrado un tratamiento de desinfección lo suficientemente eficaz como para continuar con las siguientes etapas que requiere un protocolo de propagación de una especie leñosa. 2023-07-31T12:15:38Z 2023-07-31T12:15:38Z 2014 Reunión Bogado, Facundo Ariel, Sansberro, Pedro Alfonso y Luna, Claudia Verónica, 2014. Evaluación del establecimiento in vitro de clones de Grevillea robusta. En: XX Reunión de Comunicaciones Científicas y Tecnológicas Edición 2014. Corrientes: Universidad Nacional del Nordeste. Secretaría General de Ciencia y Técnica, p. 1-1. http://repositorio.unne.edu.ar/handle/123456789/51919 spa UNNE/PI/A005-11/AR. Corrientes/Generación de tecnologías alternativas para la promoción y el desarrollo forestal regional”. Entidad financiadora: SGCyT (UNNE). Director: Dra. Claudia Luna. Codirector: Dr. Pedro Sansberro. Integrantes: E Duarte, R Acevedo. Periodo: 2012-2015. openAccess http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/2.5/ar/ application/pdf p. 1-1 application/pdf Universidad Nacional del Nordeste. Secretaría General de Ciencia y Técnica |
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La recolección de semillas de Grevillea robusta. A. Cunn. es extremadamente difícil, porque son expulsadas antes de
su maduración y a su vez, ésta generalmente es irregular. Las semillas no presentan latencia, pero pierden su
viabilidad rápidamente, por ello las técnicas biotecnológicas pueden jugar un rol importante, para el suministro
adecuado de vitroplantas como material de plantación. Sin embargo, para el establecimiento exitoso de una especie,
se hace necesario prevenir y controlar la contaminación microbiana, ya que constituye uno de los problemas más
graves en la micropropagación de especies leñosas. El objetivo de este trabajo es generar información acerca del
control de la contaminación en el establecimiento in vitro de segmentos nodales de diferentes clones de G. robusta.
Se utilizó como material vegetal los siguientes clones: P1-C7- C23 (origen Bella Vista).
El tratamiento de desinfección del material vegetal fue un cepillado fuerte y firme con solución acuosa de NaOCl al 5
%; para luego tratar a los segmentos nodales con el fungicida Carbendazim (CBZ) en una concentración de 1,5 gr.L-1;
por un tiempo de exposición de 30 minutos en agitación continua; posteriormente se los sometió a un enjuague con
Etanol 70% por 1 minuto; para luego exponerlos a solución acuosa de NaOCl 25% + Tween 2 gotas durante 20
minutos; y finalmente se los enjuagó con agua estéril. Los explantes fueron cultivados individualmente en tubos de
vidrio conteniendo 10 ml de medio nutritivo de Murashige y Skoog (1962) en su concentración original; y adicionado
con 0,5 mg.L-1 de 6-benzylaminopurina (BA) y sacarosa 3%. El pH de la solución fue ajustado a 5.8 antes de la
adición del agente gelificante (agar SIGMA® A-1296, 0.70%). Los medios de cultivo fueron esterilizados mediante
exposición en autoclave (1.45 kg.cm-2) durante 20 minutos.
Los tubos conteniendo un explante fueron obturados con Resinite e incubados durante 20 días en condiciones de luz
(fotoperiodo 14 hs., 116 μmol m-2 s-1 luz PAR) y temperatura (27±2oC) controlados. Se cultivaron 10 explantes por
tratamiento en cámara de flujo laminar, efectuándose 3 repeticiones.
Los parámetros evaluados fueron: % de explantes establecidos, % de infectados, % de explantes con ennegrecimiento
tisular y % de mortandad/supervivencia.
Si bien en todos los clones ensayados los resultados obtenidos en los parámetros evaluados fueron aceptables, el
Clon C-7 fue el que se ha destacado, con un 9,38±0,57% de infección, sin ennegrecimiento tisular evidente; un 96,93
±0,57% de establecimiento y aproximadamente un 100% de supervivencia; por ello este clon es el que presenta mejor
comportamiento para ser establecido en condiciones in vitro.
Si bien son necesarios mayores estudios, de forma preliminar se ha encontrado un tratamiento de desinfección lo
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