Mecanismos involucrados en la reabsorción de bicarbonato en el túbulo contorneado proximal de ratas seniles

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El objetivo del presente trabajo fue evaluar los posibles mecanismos involucrados en la disminución de la capacidad de acidificación tubular proximal en ratas seniles. Mediante experimentos de micropuntura determinamos la contribución del flujo de bicarbonato (JHCO3-) sensible a EIPA (inhibidor del...

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Detalles Bibliográficos
Autor principal: Fiori, Mariana C.
Formato: Tesis Doctoral
Lenguaje:Español
Publicado: 2007
Materias:
ENVEJECIMIENTO
RIÑON
ACIDIFICACION PROXIMAL
INTERCAMBIADOR NA+/H+
NHE3
NHE8
V-H+ATPASA
AMPC
PTH
AGING
KIDNEY
PROXIMAL ACIDIFICATION
NA+/H+ EXCHANGER
V-H+ATPASE
CAMP
Acceso en línea:https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n4161_Fiori
Aporte de:
Biblioteca Digital - Facultad de Ciencias Exactas y Naturales (UBA) de Universidad de Buenos Aires
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ACIDIFICACION PROXIMAL
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V-H+ATPASE
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PTH
description El objetivo del presente trabajo fue evaluar los posibles mecanismos involucrados en la disminución de la capacidad de acidificación tubular proximal en ratas seniles. Mediante experimentos de micropuntura determinamos la contribución del flujo de bicarbonato (JHCO3-) sensible a EIPA (inhibidor del intercambiador Na+/H+) y a bafilomicina (inhibidor de la V-H+ATPasa) en túbulo contorneado proximal (TCP) de ratas adultas jóvenes (3 meses) y seniles (18-20 meses). Por Western blot evaluamos, en vesículas de membrana luminal de TCP de animales adultos jóvenes y seniles, la abundancia de las isoformas NHE3 y NHE8 del intercambiador Na+/H+ y de la V-H+ATPasa. Realizamos experimentos de RT-PCR en homogenatos de corteza renal de ambos grupos experimentales para evaluar la expresión del ARNm de NHE3, NHE8 y H+ATPasa. Determinamos la concentración plasmática de la hormona paratiroidea (PTH) y la cantidad de AMPc presente en corteza renal de ambos grupos experimentales. Las ratas seniles poseen un JHCO3- 30% menor que los animales adultos jóvenes. En ratas jóvenes, EIPA reduce JHCO3- un 60% y bafilomicina un 30%, mientras que en animales seniles EIPA reduce JHCO3- aproximadamente un 60% y bafilomicina un 50%. La abundancia de la proteína y la expresión del ARNm de NHE3 y de la V-H+ATPasa fueron similares entre ambos grupos experimentales, en tanto que la cantidad de proteína y de ARNm de NHE8 fue menor en los animales seniles que en los adultos jóvenes. La concentración de PTH se encuentra aumentada en los animales seniles. Si bien la concentración de AMPc observada en la corteza renal de animales adultos jóvenes no fue significativamente diferente, en los animales seniles mostró una tendencia a aumentar. Estos resultados sugieren que el intercambiador Na+/H+ está afectado en la reabsorción de bicarbonato en el TCP de ratas seniles y que la isoforma, sensible a EIPA, responsable de la reducción del flujo de bicarbonato en estos animales es NHE8. Sin embargo, no podemos descartar mecanismos de regulación de la actividad de la V-H+ATPasa o de la isoforma NHE3 no relacionados con la transcripción o traducción de estas proteínas. Una de las alternativas para la regulación del intercambiador Na+/H+ sería la inhibición de la PTH sobre su actividad por medio de un mecanismo alternativo al mediado por AMPc.
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Por Western blot evaluamos, en vesículas de membrana luminal de TCP de animales adultos jóvenes y seniles, la abundancia de las isoformas NHE3 y NHE8 del intercambiador Na+/H+ y de la V-H+ATPasa. Realizamos experimentos de RT-PCR en homogenatos de corteza renal de ambos grupos experimentales para evaluar la expresión del ARNm de NHE3, NHE8 y H+ATPasa. Determinamos la concentración plasmática de la hormona paratiroidea (PTH) y la cantidad de AMPc presente en corteza renal de ambos grupos experimentales. Las ratas seniles poseen un JHCO3- 30% menor que los animales adultos jóvenes. En ratas jóvenes, EIPA reduce JHCO3- un 60% y bafilomicina un 30%, mientras que en animales seniles EIPA reduce JHCO3- aproximadamente un 60% y bafilomicina un 50%. La abundancia de la proteína y la expresión del ARNm de NHE3 y de la V-H+ATPasa fueron similares entre ambos grupos experimentales, en tanto que la cantidad de proteína y de ARNm de NHE8 fue menor en los animales seniles que en los adultos jóvenes. La concentración de PTH se encuentra aumentada en los animales seniles. Si bien la concentración de AMPc observada en la corteza renal de animales adultos jóvenes no fue significativamente diferente, en los animales seniles mostró una tendencia a aumentar. Estos resultados sugieren que el intercambiador Na+/H+ está afectado en la reabsorción de bicarbonato en el TCP de ratas seniles y que la isoforma, sensible a EIPA, responsable de la reducción del flujo de bicarbonato en estos animales es NHE8. Sin embargo, no podemos descartar mecanismos de regulación de la actividad de la V-H+ATPasa o de la isoforma NHE3 no relacionados con la transcripción o traducción de estas proteínas. Una de las alternativas para la regulación del intercambiador Na+/H+ sería la inhibición de la PTH sobre su actividad por medio de un mecanismo alternativo al mediado por AMPc. The aim of the present work was to evaluate the possible mechanisms involved in the diminution of proximal tubular acidification in old rats. We evaluate the contribution of EIPA, inhibitor of Na+/H+ exchanger, and bafilomycin, inhibitor of V-H+ATPase, sensitive bicarbonate flux (JHCO3-) in proximal convoluted tubules (PCT) of young (3 months) and aged (18-20 months) rats with micropuncture experiments. We measure, by Western blot experiments, in brush border membrane vesicles from PCT of young and old rats, the abundance of NHE3 and NHE8 isoforms of the Na+/H+ exchanger and the V-H+ATPase. We performed RT-PCR experiments in homogenates of renal cortex of both experimental groups to evaluate the RNAm expression of NHE3,NHE8 and H+ATPase. We measured plasmatic concentrations of parathyroid hormone (PTH) and the amount of cAMP in renal cortex of young and old rats. Bicarbonate flux in old rats was 30% lower than in young rats. EIPA reduced it by 60% and bafilomycin by 30% in young rats. EIPA reduced JHCO3- by 60% and bafilomycin by 50% in old rats. The abundance of the protein and the expression of the RNAm of NHE3 and VH+ ATPase were similar in 18-month-old and 3-month-old rats. However, the amount of protein and RNAm of NHE8 was lower in old than in young rats. PTH plasmatic concentration was increased in old rats. Even though cAMP concentration in renal cortex of young rats was not significantly different, cAMP concentration in old rats showed a tendency to increase. These results suggest that the Na+/H+ exchanger is affected in proximal convoluted tubules from aged rats. The isoform, EIPA sensitive, responsible for the reduction in bicarbonate reabsorption in these animals is NHE8. However, we can not rule out mechanisms of regulation of the V-H+ATPase or NHE3 isoform activity not related with transcription and translation of this proteins. One possibility for Na+/H+ exchanger activity regulation could be its inhibition by PTH through a mechanism different of the cAMP. Fil: Fiori, Mariana C.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina. 2007 Tesis Doctoral PDF Español info:eu-repo/semantics/openAccess https://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/ar https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n4161_Fiori

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