Determinación de la composición en aminoácidos de las proteínas de la "Lesonia Fascia" y "Lesonia Flavicans" y sus variaciones estacionales

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El presento trabajo consiste en utilizar muestras de "Losonia Fascia" y "Lesonia Flavicans" recogidas en distintos meses del año para poder determinar las variaciones de sus aminoácidos componentes. Las algas se recogieron en Puerto Deseado y previamente fueron secadas al aire en...

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Detalles Bibliográficos
Autor principal: Palladino, Ana Susana
Formato: Tesis Doctoral
Lenguaje:Español
Publicado: 1963
Acceso en línea:https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n1295_Palladino
Aporte de:
Biblioteca Digital - Facultad de Ciencias Exactas y Naturales (UBA) de Universidad de Buenos Aires
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description El presento trabajo consiste en utilizar muestras de "Losonia Fascia" y "Lesonia Flavicans" recogidas en distintos meses del año para poder determinar las variaciones de sus aminoácidos componentes. Las algas se recogieron en Puerto Deseado y previamente fueron secadas al aire en el lugar de cosecha. Una vez en Buenos Aires se secaron en estufa a baja temperatura (35-40°C), se trituraron en un molino a martillos, se volvieron a secar a 35-40°C en estufa y finalmente se molieron en un pequeño molino a bolas de porcelana. La parte experimental puede dividirse en tres etapas: l) Determinación de nitrógeno total: Se utiliza la técnica de Thompson y Morrison de kjeldhalización y nesslerización. Se parte de alga seca, sin tratamiento previo y se realiza un microkjeldhal teniendo en cuenta la temperatura y las condiciones de la muestra durante la digestión y la alcalinidad antes y después de la nesslerización. Una vez obtenida una solución ligeramente alcalina se toma de la misma una parte alícuota y sobre ella se realiza la nosslerización. Es importante la preparación y el mantenimiento de la solución del reactivo de Nessler basado en la modificación do Koch y Mc Meekin sobre el reactivo de Felin Nessler. El color de las muestras se determinó midiendo extinciones en un fotómetro espectral Carl Zeiss, modelo PMQ II. Los valores numéricos están dados por el CUADRO I. 2) Determinación de nitrógeno amínico: Se trabaja con alga seca y molida, sin tratamiento previo y se hacen hidrólisis ácida y alcalina. Sobre estos hidrolizados se realiza la titulación iodomótrica de las sales de cobro de los aminoácidos según el mótodo de Pope y Stevens puesto a punto por Schreeder, Kay y Mills. Esto procedimiento es aplicable a los aminoácidos que forman sales solubles de cobre. Para solubilizar aquellos aminoácidos que forman una sal de cobre insoluble o parcialmente soluble como la leucina, metionina, fenilalanina y triptofano, se modifica el procedimiento agregando a la solución problema una cantidad conocida de glicina. La presencia de glicina produce una sal soluble, aparentemente a traves de la formaión de una sal doble. Aclaramos que la cistina permanece insoluble aún en presencia de glicina. Los valores numéricos están dados por el CUADRO II 3) Determinación de aminoácidos por cromatografía sobre papel: Las muestras de algas para realizar la cromatografía se sometieron a hidrólisis ácida y alcalina. A continuación se efectuó el "desalting", consistente en eliminar las sales presentes que interfieren luego en el desarrollo dc los cromatogramas. Se intentó desarrollar cromatogramas ascendentes usando como solvente butanol-ácido acético-agua (40:10:50) y revelando con ninhydrina, pero no se conseguía separar satisfactoriamente las mezclas de aminoácidos. Se ensayo también la cromatografía bidimensional utilizando como solvente I butanol-ácido acético-agua (40:10:50) y como solvente II fenol-amoníaco-agua preparado de acuerdo a Underweod y Rockland. Los papeles se desarrollaron hasta 2 cm del borde y se secaron a temperatura ambiente durante mas de 24 horas, hecho que reviste suma importancia ya que en caso contrario el fondo se colorea al tratar los papeles con ninhydrina. De todos modos los resultados no fueron satisfactorios. Se encontró luego que la cromatografía descendente utilizando papel recortado según Matthias era lo mas conveniente, ya que la mayoría de los aminoácidos se separaban bien. El solvente empleado fue butanol-ácido acético-agua (40:10:50). Las manchas se revelaron con una solución de ninhydrina al 0,1 %. En los casos en que debido a la similitud de los Rf se presentaban dudas, se empleó un solvente distinto, etanol al 77 %(v/v) que separó perfectamente los aminoácidos en cuestión. Se empleó también el método descendente, así como la ninhydrina para revelar las manchas. Ver tablas I, II, III y IV en la tesis
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