Efectos y mecanismos subyacentes de la terapia génica con el sistema suicida citosina deaminasa/5-fluorocitosina en melanoma espontáneo canino

Mostrar todas las versiones(3)

Independientemente de su origen, el melanoma comparte similitudes biológicas en todas las especies. El melanoma espontáneo canino es un tumor altamente maligno, metastásico y letal que se caracteriza por su rápido crecimiento, invasión local y metástasis temprana. Como estudio preclínico dirigido a...

Descripción completa

Detalles Bibliográficos
Autor principal: Allende, Jesica Beatriz
Otros Autores: Glikin, Gerardo Claudio
Formato: Tesis doctoral publishedVersion
Lenguaje:Español
Publicado: Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales 2020
Materias:
SISTEMA SUICIDA Ycd::Yuprt/5-FC
LIPOFECCION
EFECTO BYSTANDER
ESFEROIDES
COLONIAS
APOPTOSIS
SENESCENCIA
MEDIO CONDICIONADO
Ycd::Yuprt/5-FC SUICIDE SYSTEM
LIPOFECTION
BYSTANDER EFFECT
SPHEROIDS
COLONIES
SENESCENCE
CONDITIONED MEDIUM
Acceso en línea:https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n6742_Allende
Aporte de:
Biblioteca Digital - Facultad de Ciencias Exactas y Naturales (UBA) de Universidad de Buenos Aires
id tesis:tesis_n6742_Allende
record_format dspace
institution Universidad de Buenos Aires
institution_str I-28
repository_str R-134
collection Biblioteca Digital - Facultad de Ciencias Exactas y Naturales (UBA)
language Español
orig_language_str_mv spa
topic SISTEMA SUICIDA Ycd::Yuprt/5-FC
LIPOFECCION
EFECTO BYSTANDER
ESFEROIDES
COLONIAS
APOPTOSIS
SENESCENCIA
MEDIO CONDICIONADO
Ycd::Yuprt/5-FC SUICIDE SYSTEM
LIPOFECTION
BYSTANDER EFFECT
SPHEROIDS
COLONIES
APOPTOSIS
SENESCENCE
CONDITIONED MEDIUM
spellingShingle SISTEMA SUICIDA Ycd::Yuprt/5-FC
LIPOFECCION
EFECTO BYSTANDER
ESFEROIDES
COLONIAS
APOPTOSIS
SENESCENCIA
MEDIO CONDICIONADO
Ycd::Yuprt/5-FC SUICIDE SYSTEM
LIPOFECTION
BYSTANDER EFFECT
SPHEROIDS
COLONIES
APOPTOSIS
SENESCENCE
CONDITIONED MEDIUM
Allende, Jesica Beatriz
Efectos y mecanismos subyacentes de la terapia génica con el sistema suicida citosina deaminasa/5-fluorocitosina en melanoma espontáneo canino
topic_facet SISTEMA SUICIDA Ycd::Yuprt/5-FC
LIPOFECCION
EFECTO BYSTANDER
ESFEROIDES
COLONIAS
APOPTOSIS
SENESCENCIA
MEDIO CONDICIONADO
Ycd::Yuprt/5-FC SUICIDE SYSTEM
LIPOFECTION
BYSTANDER EFFECT
SPHEROIDS
COLONIES
APOPTOSIS
SENESCENCE
CONDITIONED MEDIUM
description Independientemente de su origen, el melanoma comparte similitudes biológicas en todas las especies. El melanoma espontáneo canino es un tumor altamente maligno, metastásico y letal que se caracteriza por su rápido crecimiento, invasión local y metástasis temprana. Como estudio preclínico dirigido a mejorar los efectos locales de los genes suicidas en pacientes veterinarios oncológicos, exploramos las respuestas de diferentes líneas celulares de melanoma espontáneo canino a la proteína de fusión de la levadura Saccharomyces cereviseae citosina desaminasa/uracil fosforribosil transferasa (Ycd::Yuprt) en combinación con 5-fluorocitosina (5-FC), mediante transferencia génica no viral. Ycd cataliza el paso 5-FC a 5-fluorouracilo (5-FU) que interfiere con la replicación del ADN, mientras que Yuprt conduce a la síntesis de 5-FUTP que inhibe el procesamiento de ARNr y ARNm. En el presente estudio, encontramos que tanto cultivos en 2D como 3D resultaron sensibles al tratamiento, incluso en aquellas líneas que previamente habían manifestado cierta resistencia a otros genes suicidas ya aplicados en la clínica veterinaria. Exploramos los mecanismos subyacentes a la acción de Ycd::Yuprt/5-FC relacionados con muerte celular, arresto del ciclo celular, estrés oxidativo, capacidad clonogénica y efecto bystander, entre otros. Encontramos muerte celular inducida tanto por apoptosis como necrosis, un gran aumento de la fracción subGo y de células en un estadio de senescencia e inhibición de la formación de colonias frente a una alta concentración de 5-FC. Además, demostramos que la citotoxicidad producida dentro de las células fue capaz de difundirse al entorno extracelular, afectando también a las células que no estuvieron expuestas a la transferencia génica, poniendo en evidencia a un fuerte efecto bystander. Estos resultados fundamentan sólidamente el potencial clínico del sistema suicida Ycd::Yuprt/5-FC como adyuvante de cirugía en pacientes veterinarios oncológicos.
author2 Glikin, Gerardo Claudio
author_facet Glikin, Gerardo Claudio
Allende, Jesica Beatriz
format Tesis doctoral
Tesis doctoral
publishedVersion
author Allende, Jesica Beatriz
author_sort Allende, Jesica Beatriz
title Efectos y mecanismos subyacentes de la terapia génica con el sistema suicida citosina deaminasa/5-fluorocitosina en melanoma espontáneo canino
title_short Efectos y mecanismos subyacentes de la terapia génica con el sistema suicida citosina deaminasa/5-fluorocitosina en melanoma espontáneo canino
title_full Efectos y mecanismos subyacentes de la terapia génica con el sistema suicida citosina deaminasa/5-fluorocitosina en melanoma espontáneo canino
title_fullStr Efectos y mecanismos subyacentes de la terapia génica con el sistema suicida citosina deaminasa/5-fluorocitosina en melanoma espontáneo canino
title_full_unstemmed Efectos y mecanismos subyacentes de la terapia génica con el sistema suicida citosina deaminasa/5-fluorocitosina en melanoma espontáneo canino
title_sort efectos y mecanismos subyacentes de la terapia génica con el sistema suicida citosina deaminasa/5-fluorocitosina en melanoma espontáneo canino
publisher Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales
publishDate 2020
url https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n6742_Allende
work_keys_str_mv AT allendejesicabeatriz efectosymecanismossubyacentesdelaterapiagenicaconelsistemasuicidacitosinadeaminasa5fluorocitosinaenmelanomaespontaneocanino
AT allendejesicabeatriz effectsandunderlyingmechanismsofgenetherapywithsuicidesystemcytosinedeaminase5fluorocytosineinspontaneouscaninemelanoma
_version_ 1831982931134906368
spelling tesis:tesis_n6742_Allende2025-03-31T21:47:29Z Efectos y mecanismos subyacentes de la terapia génica con el sistema suicida citosina deaminasa/5-fluorocitosina en melanoma espontáneo canino Effects and underlying mechanisms of gene therapy with suicide system cytosine deaminase/5-fluorocytosine in spontaneous canine melanoma Allende, Jesica Beatriz Glikin, Gerardo Claudio Finocchiaro, Liliana M. E. SISTEMA SUICIDA Ycd::Yuprt/5-FC LIPOFECCION EFECTO BYSTANDER ESFEROIDES COLONIAS APOPTOSIS SENESCENCIA MEDIO CONDICIONADO Ycd::Yuprt/5-FC SUICIDE SYSTEM LIPOFECTION BYSTANDER EFFECT SPHEROIDS COLONIES APOPTOSIS SENESCENCE CONDITIONED MEDIUM Independientemente de su origen, el melanoma comparte similitudes biológicas en todas las especies. El melanoma espontáneo canino es un tumor altamente maligno, metastásico y letal que se caracteriza por su rápido crecimiento, invasión local y metástasis temprana. Como estudio preclínico dirigido a mejorar los efectos locales de los genes suicidas en pacientes veterinarios oncológicos, exploramos las respuestas de diferentes líneas celulares de melanoma espontáneo canino a la proteína de fusión de la levadura Saccharomyces cereviseae citosina desaminasa/uracil fosforribosil transferasa (Ycd::Yuprt) en combinación con 5-fluorocitosina (5-FC), mediante transferencia génica no viral. Ycd cataliza el paso 5-FC a 5-fluorouracilo (5-FU) que interfiere con la replicación del ADN, mientras que Yuprt conduce a la síntesis de 5-FUTP que inhibe el procesamiento de ARNr y ARNm. En el presente estudio, encontramos que tanto cultivos en 2D como 3D resultaron sensibles al tratamiento, incluso en aquellas líneas que previamente habían manifestado cierta resistencia a otros genes suicidas ya aplicados en la clínica veterinaria. Exploramos los mecanismos subyacentes a la acción de Ycd::Yuprt/5-FC relacionados con muerte celular, arresto del ciclo celular, estrés oxidativo, capacidad clonogénica y efecto bystander, entre otros. Encontramos muerte celular inducida tanto por apoptosis como necrosis, un gran aumento de la fracción subGo y de células en un estadio de senescencia e inhibición de la formación de colonias frente a una alta concentración de 5-FC. Además, demostramos que la citotoxicidad producida dentro de las células fue capaz de difundirse al entorno extracelular, afectando también a las células que no estuvieron expuestas a la transferencia génica, poniendo en evidencia a un fuerte efecto bystander. Estos resultados fundamentan sólidamente el potencial clínico del sistema suicida Ycd::Yuprt/5-FC como adyuvante de cirugía en pacientes veterinarios oncológicos. Regardless of its origin, melanoma shares biological similarities in all species. Canine spontaneous melanoma is a highly malignant, metastatic and lethal tumor characterized by rapid growth, local invasion and early metastasis. As a pre-clinical study aimed to improve the local effects of suicide genes on oncologic veterinary patients, we explored the responses of different spontaneous canine melanoma cell lines to yeast Saccharomyces cereviseae cytosine deaminase/uracil phosphoribosyl transferase fusion protein (Ycd::Yuprt) non-viral gene transfer in combination with 5-fluorocytosine (5-FC). Ycd catalizes the passage of 5-FC to 5-fluorouracil (5-FU) that interferes with DNA replication, while Yuprt drives to the synthesis of 5-FUTP that inhibits rRNA and mRNA processing. In the present study, we found that 2D and 3D cultures were sensitive to this treatment, even in cell lines that had previously shown some resistance to other suicide genes already applied in the veterinary clinic. We explored the underlying mechanisms of Ycd::Yuprt/5-FC related to cell death, cell cycle arrest, oxidative stress, colony formation, and bystander effect, among others. This treatment drove cells to death through apoptosis and necrosis. Furthermore, strongly increased the subGo fraction and the proportion of senescent cells while completely inhibiting colony formation at high concentrations of 5-FC. In addition, we demonstrated that the cytotoxicity produced inside the cells was able to diffuse to the extracellular environment also affecting the cells that were not exposed to gene transfer, evidencing a strong bystander effect. These results strongly support the clinical potential of Ycd::Yuprt/5-FC suicide system as surgery adjuvant treatment in oncologic veterinary patients. Fil: Allende, Jesica Beatriz. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales 2020-04-17 info:eu-repo/semantics/doctoralThesis info:ar-repo/semantics/tesis doctoral info:eu-repo/semantics/publishedVersion application/pdf spa info:eu-repo/semantics/openAccess https://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/ar https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n6742_Allende

Ejemplares similares