Recuento de glóbulos blancos residuales en concentrados de glóbulos rojos leucorreducidos para transfundir a pacientes pediátricos

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Las reacciones adversas asociadas a las transfusiones sanguíneas se atribuyen en parte a los glóbulos blancos. Esas reacciones, de tipo inmunológico o de tipo infeccioso causadas por agentes Ieucotrópicos, pueden limitarse reduciendo el número de glóbulos blancos en los componentes sanguíneos lo que...

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Detalles Bibliográficos
Autor principal: Giorgi, Alejandra
Otros Autores: Wainstok, Rosa
Formato: Tesis de maestría publishedVersion
Lenguaje:Español
Publicado: Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales 2006
Materias:
LEUCORREDUCCION
ESTANDARES INTERNACIONALES
TRANSFUSION DE SANGRE
Acceso en línea:https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n4196_Giorgi
Aporte de:
Biblioteca Digital - Facultad de Ciencias Exactas y Naturales (UBA) de Universidad de Buenos Aires
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description Las reacciones adversas asociadas a las transfusiones sanguíneas se atribuyen en parte a los glóbulos blancos. Esas reacciones, de tipo inmunológico o de tipo infeccioso causadas por agentes Ieucotrópicos, pueden limitarse reduciendo el número de glóbulos blancos en los componentes sanguíneos lo que se denomina Ieucorreducción (LR) o Ieucodepleción (LD). La leucorreducción de hemocomponentes es efectiva para disminuir las siguientes complicaciones transfusionales mediadas por glóbulos blancos alogeneicos: reacciones transfusionales febriles no hemolíticas (RTFNH), aloinmunización HLA y transmisión de citomegalovirus. Cuando se efectúa antes de las 72 hs de la extracción de sangre se denomina Ieucorreducción pre-almacenamiento. Esta modalidad tiene la ventaja de evitar la acumulación de citoquinas proinflamatorias sintetizadas por los glóbulos blancos durante el almacenamiento y de permitir el control de calidad de los componentes Ieucorreducidos. Este estudio se realizó en el Servicio de Hemoterapia del Hospital General de Niños Dr. Ricardo Gutiérrez de la Ciudad de Buenos Aires para evaluar la calidad de los concentrados de glóbulos rojos Ieucorreducidos en cuanto a la cantidad de leucocitos residuales. En nuestro país la Resolución 58/2005 del Ministerio de Salud y Ambiente, “Normas técnicas y administrativas de la Especialidad Hemoterapia” que complementa a la Ley N° 22990 fija un nivel máximo de 5 x 10ˆ6 leucocitos residuales en concentrados de glóbulos rojos leucorreducidos y establece la necesidad de validar el procedimiento de Ieucorreducción. Dado que los contadores automatizados no tienen la sensibilidad necesaria para el recuento de glóbulos blancos en componentes sanguíneos leucorreducidos se puso a punto una técnica de recuento de leucocitos residuales mediante citometría de flujo utilizando un reactivo cuyo componente principal, el ioduro de propidio, es un colorante específico de ácidos nucleicos. El reactivo además contiene RNasa para la digestión de ARN celular y un número definido de microesferas fluorescentes que se utilizan como referencia para calcular el recuento absoluto de glóbulos blancos. Para la validación del procedimiento de leucorreducción de concentrados de glóbulos rojos se adoptó el plan de muestreo y el análisis estadístico propuesto por la “International Society of Blood Transfusion”. Se eligieron al azar 20 unidades de concentrados de glóbulos rojos obtenidos con equipos de recolección de sangre con filtros integrados para Ieucorreducir glóbulos rojos. La filtración se realizó a temperatura ambiente entre las 2-3 horas de la extracción de sangre. La cantidad de glóbulos blancos prefiltración se determinó con contador automatizado y la cantidad de glóbulos blancos residuales se determinó mediante la técnica de recuento por citometría de flujo. La media y la desviación estándar de leucocitos residuales en los concentrados de glóbulos rojos leucorreducidos fue de 0,36 x 10 5 +/- 0,29 x 10 6 leucocitos por unidad. Los datos se analizaron según un método paramétrico al comprobarse que los logm de los recuentos de glóbulos blancos residuales se comportaron según una distribución normal. Como la media de los log10 de los datos fue menor que el máximo aceptable se pudo afirmar con un nivel de confianza del 95% que al menos el 95% de los concentrados de glóbulos rojos leucorreducidos cumple con eI requisito de tener una cantidad de leucocitos inferior a 5x10ˆ6. Esto significa que el procedimiento de Ieucorreducción aplicado en el Servicio de Hemoterapia está validado, es decir que garantiza la obtención de concentrados de glóbulos rojos consistentes con los niveles de leucocitos residuales requeridos por la legislación argentina. Lo cual es de singular beneficio a la hora de transfundir a pacientes pediátricos y neonatales considerados de riesgo.
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spelling tesis:tesis_n4196_Giorgi2023-10-02T19:57:03Z Recuento de glóbulos blancos residuales en concentrados de glóbulos rojos leucorreducidos para transfundir a pacientes pediátricos Giorgi, Alejandra Wainstok, Rosa LEUCORREDUCCION ESTANDARES INTERNACIONALES TRANSFUSION DE SANGRE Las reacciones adversas asociadas a las transfusiones sanguíneas se atribuyen en parte a los glóbulos blancos. Esas reacciones, de tipo inmunológico o de tipo infeccioso causadas por agentes Ieucotrópicos, pueden limitarse reduciendo el número de glóbulos blancos en los componentes sanguíneos lo que se denomina Ieucorreducción (LR) o Ieucodepleción (LD). La leucorreducción de hemocomponentes es efectiva para disminuir las siguientes complicaciones transfusionales mediadas por glóbulos blancos alogeneicos: reacciones transfusionales febriles no hemolíticas (RTFNH), aloinmunización HLA y transmisión de citomegalovirus. Cuando se efectúa antes de las 72 hs de la extracción de sangre se denomina Ieucorreducción pre-almacenamiento. Esta modalidad tiene la ventaja de evitar la acumulación de citoquinas proinflamatorias sintetizadas por los glóbulos blancos durante el almacenamiento y de permitir el control de calidad de los componentes Ieucorreducidos. Este estudio se realizó en el Servicio de Hemoterapia del Hospital General de Niños Dr. Ricardo Gutiérrez de la Ciudad de Buenos Aires para evaluar la calidad de los concentrados de glóbulos rojos Ieucorreducidos en cuanto a la cantidad de leucocitos residuales. En nuestro país la Resolución 58/2005 del Ministerio de Salud y Ambiente, “Normas técnicas y administrativas de la Especialidad Hemoterapia” que complementa a la Ley N° 22990 fija un nivel máximo de 5 x 10ˆ6 leucocitos residuales en concentrados de glóbulos rojos leucorreducidos y establece la necesidad de validar el procedimiento de Ieucorreducción. Dado que los contadores automatizados no tienen la sensibilidad necesaria para el recuento de glóbulos blancos en componentes sanguíneos leucorreducidos se puso a punto una técnica de recuento de leucocitos residuales mediante citometría de flujo utilizando un reactivo cuyo componente principal, el ioduro de propidio, es un colorante específico de ácidos nucleicos. El reactivo además contiene RNasa para la digestión de ARN celular y un número definido de microesferas fluorescentes que se utilizan como referencia para calcular el recuento absoluto de glóbulos blancos. Para la validación del procedimiento de leucorreducción de concentrados de glóbulos rojos se adoptó el plan de muestreo y el análisis estadístico propuesto por la “International Society of Blood Transfusion”. Se eligieron al azar 20 unidades de concentrados de glóbulos rojos obtenidos con equipos de recolección de sangre con filtros integrados para Ieucorreducir glóbulos rojos. La filtración se realizó a temperatura ambiente entre las 2-3 horas de la extracción de sangre. La cantidad de glóbulos blancos prefiltración se determinó con contador automatizado y la cantidad de glóbulos blancos residuales se determinó mediante la técnica de recuento por citometría de flujo. La media y la desviación estándar de leucocitos residuales en los concentrados de glóbulos rojos leucorreducidos fue de 0,36 x 10 5 +/- 0,29 x 10 6 leucocitos por unidad. Los datos se analizaron según un método paramétrico al comprobarse que los logm de los recuentos de glóbulos blancos residuales se comportaron según una distribución normal. Como la media de los log10 de los datos fue menor que el máximo aceptable se pudo afirmar con un nivel de confianza del 95% que al menos el 95% de los concentrados de glóbulos rojos leucorreducidos cumple con eI requisito de tener una cantidad de leucocitos inferior a 5x10ˆ6. Esto significa que el procedimiento de Ieucorreducción aplicado en el Servicio de Hemoterapia está validado, es decir que garantiza la obtención de concentrados de glóbulos rojos consistentes con los niveles de leucocitos residuales requeridos por la legislación argentina. Lo cual es de singular beneficio a la hora de transfundir a pacientes pediátricos y neonatales considerados de riesgo. White blood cells have been associated with a number of transfusion-related effects such as immunological complications and transmission of infectious agents. Leukoreduction or Ieucodepletion is a process by which the number of leukocytes in cellular blood components is decreased. Leukoreduction is able to reduce the rate of three complications of transfusion due to allogeneic wbc: recurrent febrile nonhemolytic transfusion reactions, alloinmunization HLAand transmission of cytomegalovirus. When it is performed shortly after blood collection (before 72 hs) it is called pre-storage leukoreduction. Pre-storage prevents accumulation of proinflammatory cytokines which are synthesized by white blood cells during storage and allows quality control of wbc-reduced blood components. The aim of this study was to evaluate the level of residual white blood cells in red cells concentrates prepared at Blood Bank of Hospital General de Niños Dr. Ricardo Gutiérrez of Ciudad de Buenos Aires. Current standard in our country requires that Ieukoreduced red cell concentrates contain less than 5 x 10 6 Ieukocytes per unit and states that leukoreduction process should be validated. Because automated analyzers have not the sensitiveness for counting white blood cells in Ieukoreduced products, a counting method by flow cytometry was performed. Reagents include propidium iodide to stain nuclear DNA,an RNase to digest residual cellular RNAand a defined number of fluorescent beads. The beads provide an internal reference for obtaining an absolute cell count. For leukoreduction process validation sampling plan and statistical analysis proposed by the International Society of Blood Transfusion were adopted. We monitored 20 units of red cells concentrates obtained with Blood Bag Collection with Ieukoreduction filter. Filtrationwas performed at room temperature between 2-3 hours after collection. Before filtration white blood cells were counted with automatic analyzer and after filtration residual white blood cells content was determined by flow cytometry. Mean and standard deviation in Ieukorreduced packed red cells was 0,36 x 10 6 +/- 0,29 x 10 6 Ieukocytes per unit. We analised the process capability by a parametric approach because we verified lognormal distribution of the residual white blood cells content of Ieukoreduced units. Because the observed mean log 1oof the sample is less than the maximum acceptable mean log _10, the process does have 95 percent confidence that 95 percent or more of components meet the standard. This evidence is highly reliable to assure that Ieukoreduction process will consistently result in red blood cells concentrates meeting Specifications of residual wbc content. High-risk pediatric and neonatal patients receiving these wbc- reduced blood components willtake profit of it . Fil: Giorgi, Alejandra. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales 2006 info:eu-repo/semantics/masterThesis info:ar-repo/semantics/tesis de maestría info:eu-repo/semantics/publishedVersion application/pdf spa info:eu-repo/semantics/openAccess https://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/ar https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n4196_Giorgi

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