Adrenocorticotropina induce en células adrenales la formación de podosomas vía la inducción de la fosforilación en tirosina de caveolina-1

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Las células de la línea adrenocortical Y1 responden a ACTH, con un incremento en la síntesis y secreción de hormonas esteroides, con un consecuente cambio en la morfología celular (rounding up) que facilita la traducción de la señal mediada por el AMP cíclico, e inducción del transporte del colester...

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Detalles Bibliográficos
Autor principal: Colonna, Cecilia
Otros Autores: Podestá, Ernesto J.
Formato: Tesis doctoral publishedVersion
Lenguaje:Español
Publicado: Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales 2005
Materias:
ESTEROIDOGENESIS
PROTEINA QUINASA A
REDONDEO CELULAR
CAVEOLINA-1
CITOESQUELETO
PODOSOMAS
PROTEIN KINASE A
ROUNDING-UP
STEROIDOGENESIS
ACTIN CYTOSKELETON
CAVEOLIN-1
PODOSOMES
Acceso en línea:http://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n3807_Colonna
Aporte de:
Biblioteca Digital - Facultad de Ciencias Exactas y Naturales (UBA) de Universidad de Buenos Aires
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description Las células de la línea adrenocortical Y1 responden a ACTH, con un incremento en la síntesis y secreción de hormonas esteroides, con un consecuente cambio en la morfología celular (rounding up) que facilita la traducción de la señal mediada por el AMP cíclico, e inducción del transporte del colesterol de la membrana mitocondrial externa a la interna, paso limitante en la esteroidogénesis. La compartimentalización intracelular es fundamental para determinar la especificidad de distintos caminos de señalización mediados por el mismo segundo mensajero; es en este sentido que la existencia de los microdominios de membrana denominado caveola, han demostrado tener un rol fundamental en la comparti-mentalización de moléculas dentro de la célula. A su vez, la caveolina interactúa con diversas proteínas regulando así su actividad. El objetivo de la presente tesis fue estudiar la participación de caveolina-1, proteína estructural de la caveola, en un sistema esteroidogénico, dependiente de la vía de activación de la proteína quinasa A asociado a cambios en el citoesqueleto, y su regulación por ACTH y asociación con estructuras del citoesqueleto. Se demostró que ACTH, vía AMP cíclico, induce la traslocación y fosforilación en tirosina de caveolina-1. En condiciones basales la fosfocaveolina se distribuye en los extremos de los filamentos de actina, siendo su localización semejante a los sitios de adhesión focal. Luego de la estimulación por ACTH/8Br-AMPc, hay un cambio en la estructura asociada a fosfocaveolina, que se redondea formando una estructura en forma de anillo o roseta, que contiene un centro de F-actina circundado por fosfocaveolina-1, y se distribuye en la periferia celular. El número de anillos incrementa luego del tratamiento hormonal y se correlaciona con la inducción en la fosforilación de caveolina-1 por ACTH78Br-AMPc. Estudios de microscopía confocal y electrónica, además de colocalización con proteínas del citoesqueleto, revelan que se trata de una estructura de adhesión celular denominada podosoma. La formación de podosomas inducida por ACTH en las células Y1 depende de la actividad de una proteína tirosina quinasa mediada por inducción de la proteína quinasa A. Se demostró además la participación de las pequeñas proteínas Rho GTPasas en la inducción del redondeo celular mediado por ACTH. Estos resultados reafirman, una vez más, que las respuestas funcionales y morfológicas inducidas por la activación de la PKA en células esteroidogénicas están relacionadas con la dinámica del citoesqueleto y demuestran la participación de una nuevo blanco de ACTH, la caveolina-1.
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spelling tesis:tesis_n3807_Colonna2023-10-02T19:53:16Z Adrenocorticotropina induce en células adrenales la formación de podosomas vía la inducción de la fosforilación en tirosina de caveolina-1 ACTH-induced caveolin-1 phosphorylation is related to podosome assembly in y1 adrenal cells Colonna, Cecilia Podestá, Ernesto J. ESTEROIDOGENESIS PROTEINA QUINASA A REDONDEO CELULAR CAVEOLINA-1 CITOESQUELETO PODOSOMAS PROTEIN KINASE A ROUNDING-UP STEROIDOGENESIS ACTIN CYTOSKELETON CAVEOLIN-1 PODOSOMES Las células de la línea adrenocortical Y1 responden a ACTH, con un incremento en la síntesis y secreción de hormonas esteroides, con un consecuente cambio en la morfología celular (rounding up) que facilita la traducción de la señal mediada por el AMP cíclico, e inducción del transporte del colesterol de la membrana mitocondrial externa a la interna, paso limitante en la esteroidogénesis. La compartimentalización intracelular es fundamental para determinar la especificidad de distintos caminos de señalización mediados por el mismo segundo mensajero; es en este sentido que la existencia de los microdominios de membrana denominado caveola, han demostrado tener un rol fundamental en la comparti-mentalización de moléculas dentro de la célula. A su vez, la caveolina interactúa con diversas proteínas regulando así su actividad. El objetivo de la presente tesis fue estudiar la participación de caveolina-1, proteína estructural de la caveola, en un sistema esteroidogénico, dependiente de la vía de activación de la proteína quinasa A asociado a cambios en el citoesqueleto, y su regulación por ACTH y asociación con estructuras del citoesqueleto. Se demostró que ACTH, vía AMP cíclico, induce la traslocación y fosforilación en tirosina de caveolina-1. En condiciones basales la fosfocaveolina se distribuye en los extremos de los filamentos de actina, siendo su localización semejante a los sitios de adhesión focal. Luego de la estimulación por ACTH/8Br-AMPc, hay un cambio en la estructura asociada a fosfocaveolina, que se redondea formando una estructura en forma de anillo o roseta, que contiene un centro de F-actina circundado por fosfocaveolina-1, y se distribuye en la periferia celular. El número de anillos incrementa luego del tratamiento hormonal y se correlaciona con la inducción en la fosforilación de caveolina-1 por ACTH78Br-AMPc. Estudios de microscopía confocal y electrónica, además de colocalización con proteínas del citoesqueleto, revelan que se trata de una estructura de adhesión celular denominada podosoma. La formación de podosomas inducida por ACTH en las células Y1 depende de la actividad de una proteína tirosina quinasa mediada por inducción de la proteína quinasa A. Se demostró además la participación de las pequeñas proteínas Rho GTPasas en la inducción del redondeo celular mediado por ACTH. Estos resultados reafirman, una vez más, que las respuestas funcionales y morfológicas inducidas por la activación de la PKA en células esteroidogénicas están relacionadas con la dinámica del citoesqueleto y demuestran la participación de una nuevo blanco de ACTH, la caveolina-1. Y1 adrenocortical cells respond to ACTH with a characteristic rounding-up that facilitates cAMP signaling, critical for transport of cholesterol to the mitochondria and increase in steroid secretion. Compartmentalization of molecules within the cell is a key facet of cellular regulation and specificity. In this sense, caveolae microdomains have been shown to be implicated in the regulation of signal transduction pathways, as caveolin-1, the structural protein of caveolae, associates with key regulatory proteins that localize within caveolae, and controls at the same time their activity. We here demonstrate that caveolin-1 participates in coupling activation of protein kinase A (PKA) to the control of cell shape. ACTH/8-Br-cAMP induced reorganization of caveolin-1-positive structures in correlation with the cellular rounding-up. Concomitant with this change there was an increase in the phosphorylation of caveolin-1 (Tyr-14) localized at focal adhesions (FA) with reorganization of FA to rounded, ring-like structures. Colocalization with Phalloidin showed that phosphocaveolin is present at the edge of actin filaments and that after ACTH stimulation, F-actin dots at the cell periphery become surrounded by phosphocaveolin-1. These observations, along with confocal and electron microscopy studies, as well as colocalization with cytoskeletal markers, revealed these structures as podosomes. Podosome assembly was dependent on both PKA and tyrosine kinase activities since their formation was impaired after treatment with specific inhibitors, such as myristoylated peptide kinase inhibitor (PKI), or Src inhibitor PP2, respectively, previous to ACTH/ 8-Br-cAMP stimulation. We demonstrate also the participation of the small RhoGTPases in coupling ACTH signal to the cellular rounding-up. These results show for the first time that ACTH induces caveolin-1 phosphorrylation and podosome assembly in Y1 cells and support the view that the morphological and functional responses to PKA activation in steroidogenic cells are related to cytoskeleton dynamics. Fil: Colonna, Cecilia. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales 2005 info:eu-repo/semantics/doctoralThesis info:ar-repo/semantics/tesis doctoral info:eu-repo/semantics/publishedVersion application/pdf spa info:eu-repo/semantics/openAccess https://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/ar http://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n3807_Colonna

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