Caracterización del proceso de translocación de poliprenol azúcares a través de membranas biológicas

Mostrar todas las versiones(3)

La biogénesis de estructuras complejas que contienen hidratos decarbono como el lipopolisacárido (LPS), los exopolisacáridos, elpeptidoglicano y los ácidos teicoicos en procariotas y las glicoproteínas eneucariotas se realiza generalmente a partir de precursores nucleótido-azúcaresque transfieren su...

Descripción completa

Guardado en:

Detalles Bibliográficos
Autor principal:	Feldman, Mario F.
Otros Autores:	Parodi, Armando J.
Formato:	Tesis doctoral publishedVersion
Lenguaje:	Español
Publicado:	Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales 2000
Acceso en línea:	https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n3261_Feldman
Aporte de:	Biblioteca Digital - Facultad de Ciencias Exactas y Naturales (UBA) de Universidad de Buenos Aires

id	tesis:tesis_n3261_Feldman
record_format	dspace
spelling	tesis:tesis_n3261_Feldman2023-10-02T19:46:41Z Caracterización del proceso de translocación de poliprenol azúcares a través de membranas biológicas Feldman, Mario F. Parodi, Armando J. La biogénesis de estructuras complejas que contienen hidratos decarbono como el lipopolisacárido (LPS), los exopolisacáridos, elpeptidoglicano y los ácidos teicoicos en procariotas y las glicoproteínas eneucariotas se realiza generalmente a partir de precursores nucleótido-azúcaresque transfieren sus restos de azúcares a poliprenoles como elundecaprenol y el dolicol (Dol). Los nucleótido azúcares se encuentrannormalmente disponibles en el citoplasma, mientras que los poliprenolesestán asociados con una bicapa lipídica.Una vez ensamblados, los azúcaresunidos al poliprenol deben atravesar membranas para su posteriorprocesamiento (polimerización como en el caso del LPS o transferencia aproteínas como ocurre en la formación de glicoproteínas). Este proceso noocurre espontaneamente y parece estar mediado por proteinas, aunque sólopara el pasaje a través de Ia membrana interna procariótica de lassubunidades de antígeno O (el componente más variable del LPS) se haidentificado una proteína, denominada Wzx con actividad translocasa o “flipasa”. Las diferentes translocasas Wzx poseen una muy baja homología desecuencias tanto a nivel de DNA como de proteínas. Los intentos parasobreexpresar Wzx han sido infructuosos, lo que no ha permitido la realizaciónde experimentos tendientes a caracterizar estructural y mecanísticamente alas translocasas. En este trabajo se investigó si es necesario que las subunidades O sesinteticen completamente para poder ser translocadas. Se obtuvo unamutante en el gen glf, responsable de la síntesis de galactofuranosa, el últimode los cuatro azúcares que componen la subunidad O16 en Escherichia coli. Se observó que esta mutante es capaz de translocar una subunidadincompleta conteniendo sólo tres azúcares a través de la membrana. Experimentos utilizando la lectina del germen de trigo (WGA) permitieronestablecer que también es posible translocar una subunidad truncadaconteniendo sólo uno o dos residuos e incorporar estos azúcares al core del LPS. Experimentos de complementación realizados en una mutante de E.coli O7 en el gen wzx con translocasas de Salmonella enterica y E. coli O16demostraron que la translocación de subunidades de antígeno O esindependiente de la naturaleza química de la porción glicosídica de lasubunidad O. Por el contrario las putativas translocasas involucradas en lasíntesis de exopolisacáridos no fueron capaces de complementar la mutaciónen wzx. Los resultados presentados en esta Tesis indican que no se requiereque la subunidad O esté completa para que sea reconocida por la maquinariade translocación y se produzca su pasaje a través de la membrana, pudiendotranslocarse subunidades truncadas o completamente diferentes a las quenormalmente se producen en una determinada cepa. Los resultadosobtenidos sugieren además un modelo de biosíntesis de antígeno O queinvolucra el reconocimiento del prenol-oligosacárido por un hipotéticocomplejo compuesto por la putativa translocasa Wzx y otras proteínas queparticipan en la síntesis de antígeno O. Fil: Feldman, Mario F.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales 2000 info:eu-repo/semantics/doctoralThesis info:ar-repo/semantics/tesis doctoral info:eu-repo/semantics/publishedVersion application/pdf spa info:eu-repo/semantics/openAccess https://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/ar https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n3261_Feldman
institution	Universidad de Buenos Aires
institution_str	I-28
repository_str	R-134
collection	Biblioteca Digital - Facultad de Ciencias Exactas y Naturales (UBA)
language	Español
orig_language_str_mv	spa
description	La biogénesis de estructuras complejas que contienen hidratos decarbono como el lipopolisacárido (LPS), los exopolisacáridos, elpeptidoglicano y los ácidos teicoicos en procariotas y las glicoproteínas eneucariotas se realiza generalmente a partir de precursores nucleótido-azúcaresque transfieren sus restos de azúcares a poliprenoles como elundecaprenol y el dolicol (Dol). Los nucleótido azúcares se encuentrannormalmente disponibles en el citoplasma, mientras que los poliprenolesestán asociados con una bicapa lipídica.Una vez ensamblados, los azúcaresunidos al poliprenol deben atravesar membranas para su posteriorprocesamiento (polimerización como en el caso del LPS o transferencia aproteínas como ocurre en la formación de glicoproteínas). Este proceso noocurre espontaneamente y parece estar mediado por proteinas, aunque sólopara el pasaje a través de Ia membrana interna procariótica de lassubunidades de antígeno O (el componente más variable del LPS) se haidentificado una proteína, denominada Wzx con actividad translocasa o “flipasa”. Las diferentes translocasas Wzx poseen una muy baja homología desecuencias tanto a nivel de DNA como de proteínas. Los intentos parasobreexpresar Wzx han sido infructuosos, lo que no ha permitido la realizaciónde experimentos tendientes a caracterizar estructural y mecanísticamente alas translocasas. En este trabajo se investigó si es necesario que las subunidades O sesinteticen completamente para poder ser translocadas. Se obtuvo unamutante en el gen glf, responsable de la síntesis de galactofuranosa, el últimode los cuatro azúcares que componen la subunidad O16 en Escherichia coli. Se observó que esta mutante es capaz de translocar una subunidadincompleta conteniendo sólo tres azúcares a través de la membrana. Experimentos utilizando la lectina del germen de trigo (WGA) permitieronestablecer que también es posible translocar una subunidad truncadaconteniendo sólo uno o dos residuos e incorporar estos azúcares al core del LPS. Experimentos de complementación realizados en una mutante de E.coli O7 en el gen wzx con translocasas de Salmonella enterica y E. coli O16demostraron que la translocación de subunidades de antígeno O esindependiente de la naturaleza química de la porción glicosídica de lasubunidad O. Por el contrario las putativas translocasas involucradas en lasíntesis de exopolisacáridos no fueron capaces de complementar la mutaciónen wzx. Los resultados presentados en esta Tesis indican que no se requiereque la subunidad O esté completa para que sea reconocida por la maquinariade translocación y se produzca su pasaje a través de la membrana, pudiendotranslocarse subunidades truncadas o completamente diferentes a las quenormalmente se producen en una determinada cepa. Los resultadosobtenidos sugieren además un modelo de biosíntesis de antígeno O queinvolucra el reconocimiento del prenol-oligosacárido por un hipotéticocomplejo compuesto por la putativa translocasa Wzx y otras proteínas queparticipan en la síntesis de antígeno O.
author2	Parodi, Armando J.
author_facet	Parodi, Armando J. Feldman, Mario F.
format	Tesis doctoral Tesis doctoral publishedVersion
author	Feldman, Mario F.
spellingShingle	Feldman, Mario F. Caracterización del proceso de translocación de poliprenol azúcares a través de membranas biológicas
author_sort	Feldman, Mario F.
title	Caracterización del proceso de translocación de poliprenol azúcares a través de membranas biológicas
title_short	Caracterización del proceso de translocación de poliprenol azúcares a través de membranas biológicas
title_full	Caracterización del proceso de translocación de poliprenol azúcares a través de membranas biológicas
title_fullStr	Caracterización del proceso de translocación de poliprenol azúcares a través de membranas biológicas
title_full_unstemmed	Caracterización del proceso de translocación de poliprenol azúcares a través de membranas biológicas
title_sort	caracterización del proceso de translocación de poliprenol azúcares a través de membranas biológicas
publisher	Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales
publishDate	2000
url	https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n3261_Feldman
work_keys_str_mv	AT feldmanmariof caracterizaciondelprocesodetranslocaciondepoliprenolazucaresatravesdemembranasbiologicas
_version_	1782023208833122304

Caracterización del proceso de translocación de poliprenol azúcares a través de membranas biológicas

Ejemplares similares