Identificación y análisis funcional de los factores que regulan la transcripción del gen de fibronectina humana
El presente trabajo de tesis esta centrado en el estudio de la region promotora del gen de lafibronectina humana (FN). En primer lugar se han definido los roles funcionales in vitro ein vivo de los elementos FN-CRE y FN-CCAAT. Ambos enfoques coincidieron en definira los factores CRE y CCAAT como mod...
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Formato: | Tesis doctoral publishedVersion |
Lenguaje: | Español |
Publicado: |
Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales
1998
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Acceso en línea: | https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n2995_Alonso |
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tesis:tesis_n2995_Alonso2023-10-02T19:43:28Z Identificación y análisis funcional de los factores que regulan la transcripción del gen de fibronectina humana Identification and functional analysis of factors that regulate the transcription of the fibronectin gene Alonso, Claudio Roberto Kornblihtt, Alberto Rodolfo El presente trabajo de tesis esta centrado en el estudio de la region promotora del gen de lafibronectina humana (FN). En primer lugar se han definido los roles funcionales in vitro ein vivo de los elementos FN-CRE y FN-CCAAT. Ambos enfoques coincidieron en definira los factores CRE y CCAAT como moduladores positivos de la actividad transcripcionaldel gen FN. Mediante experimentos de inmuno-precipitacion y retardo en gel seidentificaron las proteinas NF-I y CPI como los factores hepaticos que se unen al elemento FN-CCAAT. Posteriormente a traves de la implementacion de una nueva metodología quecombina la inmunoprecipitación con el entrecruzamiento covalente por luz U.V. se detectóla interacciín física entre la proteína de union a CRE, ATF-2 y los factores CCAAT, CPI y NF-I. Debido a la importancia fisiológica de los cambios cuali y cuantitativos en laexpresion de la fibronectina vinculados a procesos de fibrosis hepática, se caracterizaronlos factores que se unen al elemento FN-CRE en diferentes tipos celulares hepaticos. Losresultados mostraron que los factores ATF-2 y ATF-3 ocupan el elemento solo enhepatocitos, mientras que otros factores, como la proteina FRA-2 ocupan el elemento CREtanto en hepatocitos como en celulas endoteliales sinusoidales (SEC). Experimentos detransfección transitoria de cultivos primarios de hepatocitos y SEC, permitieron definirelementos enhancer y silencer dentro del promotor asi como la region necesaria paraconferir inducibilidad al factor de crecimiento TGF-β. Estos resultados proveen lasprimeras evidencias de una ocupacion y funcionamiento diferenciales del promotor FNespecíficos de tipo celular hepático. The present work was focused in the study of the promoter region of the humanfibronectin gene (FN). First, we defined the in vitro and in vivo functional roles of the FN-CRE and FN-CCAAT elements. Both approaches have agreed to define the CRE and CCAAT factors as positive modulators of the transcriptional activity of the FN gene. Through immunoprecipitation and gel shift experiments the proteins NF-I and CPI wereidentified as the liver factors that bind the FN-CCAAT element. Thanks to the developmentof a new methodology that combines immunoprecipitation and UV crosslinkingtechniques, it was possible to define the physical interaction among the CRE protein ATF2and the CCAAT factors NF-I and CPI. In virtue of the physiological relevance of thequalitative and quantitative changes in the FN expression associated with hepatic fibrosis,the factors that bind the FN-CRE element in different liver cell types were characterized. Results showed that factors ATP-2 and ATP-3 bind the element only in hepatocytes, whileother factors, such as FRA-2 were present in both hepatocytes and sinusoidal endothelialcells (SEC). Transient transfection experiments carried out on primary cultures ofhepatocytes and SEC, allowed to define enhancer and silencer elements within thepromoter, as well as the minimal region needed to confer inducibility to the growth factor TGF-B.These results provide the first evidences of a differential occupation and functionof the FN promoter specific of liver cell types. Fil: Alonso, Claudio Roberto. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales 1998 info:eu-repo/semantics/doctoralThesis info:ar-repo/semantics/tesis doctoral info:eu-repo/semantics/publishedVersion application/pdf spa info:eu-repo/semantics/openAccess https://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/ar https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n2995_Alonso |
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El presente trabajo de tesis esta centrado en el estudio de la region promotora del gen de lafibronectina humana (FN). En primer lugar se han definido los roles funcionales in vitro ein vivo de los elementos FN-CRE y FN-CCAAT. Ambos enfoques coincidieron en definira los factores CRE y CCAAT como moduladores positivos de la actividad transcripcionaldel gen FN. Mediante experimentos de inmuno-precipitacion y retardo en gel seidentificaron las proteinas NF-I y CPI como los factores hepaticos que se unen al elemento FN-CCAAT. Posteriormente a traves de la implementacion de una nueva metodología quecombina la inmunoprecipitación con el entrecruzamiento covalente por luz U.V. se detectóla interacciín física entre la proteína de union a CRE, ATF-2 y los factores CCAAT, CPI y NF-I. Debido a la importancia fisiológica de los cambios cuali y cuantitativos en laexpresion de la fibronectina vinculados a procesos de fibrosis hepática, se caracterizaronlos factores que se unen al elemento FN-CRE en diferentes tipos celulares hepaticos. Losresultados mostraron que los factores ATF-2 y ATF-3 ocupan el elemento solo enhepatocitos, mientras que otros factores, como la proteina FRA-2 ocupan el elemento CREtanto en hepatocitos como en celulas endoteliales sinusoidales (SEC). Experimentos detransfección transitoria de cultivos primarios de hepatocitos y SEC, permitieron definirelementos enhancer y silencer dentro del promotor asi como la region necesaria paraconferir inducibilidad al factor de crecimiento TGF-β. Estos resultados proveen lasprimeras evidencias de una ocupacion y funcionamiento diferenciales del promotor FNespecíficos de tipo celular hepático. |
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