Múltiples interacciones determinan la participación de ATF-2 en la regulación transcripcional del promotor del gen de la fibronectina humana

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En esta tesis hemos explorado los mecanismos transcripcionales implicados en elfuncionamiento del promotor de gen de la fibronectina humana (FN). En primer lugar seanalizó el impacto de mutaciones en los elementos CRE -170 y CCAAT -150 del promotorsobre la unión de factores de transcripción específi...

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Detalles Bibliográficos
Autor principal: Pesce, Carlos Gustavo
Otros Autores: Kornblihtt, Alberto Rodolfo
Formato: Tesis doctoral publishedVersion
Lenguaje:Español
Publicado: Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales 1997
Materias:
FIBRONECTINA
TRANSCRIPCIÓN
AMP CÍCLICO
RNA ANTISENTIDO
CÉLULAS ANTISENTIDO
CÉLULAS HEPÁTICAS
ATF-2
ELEMENTO CCAAT
INTERACCIÓN RPOTEÍNA-PROTEÍNA
FIBRONECTIN
TRANSCRIPTION
CYCLIC AMP
ANTISENSE RNA
HEPATIC CELLS
CCAAT BOX
PROTEIN-PROTEIN INTERACTIONS
Acceso en línea:https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n2968_Pesce
Aporte de:
Biblioteca Digital - Facultad de Ciencias Exactas y Naturales (UBA) de Universidad de Buenos Aires
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Pesce, Carlos Gustavo
Múltiples interacciones determinan la participación de ATF-2 en la regulación transcripcional del promotor del gen de la fibronectina humana
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CYCLIC AMP
ANTISENSE RNA
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ATF-2
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description En esta tesis hemos explorado los mecanismos transcripcionales implicados en elfuncionamiento del promotor de gen de la fibronectina humana (FN). En primer lugar seanalizó el impacto de mutaciones en los elementos CRE -170 y CCAAT -150 del promotorsobre la unión de factores de transcripción específicos in vitro y se confirmó la cooperaciónentre los sitios CRE y CCAAT. En segundo lugar el efecto de las mutaciones sobre laactividad del promotor fue analizado en transfecciones transientes en células de hepatomahumano y en líneas celulares fibroblásticas. Estos experimentos demostraron la importanciafuncional de los elementos CRE y CCAAT del promotor de FN y sugirieron la existencia deinteracciones funcionales entre las proteínas que se unen a estos sitios. Se analizó también larespuesta del promotor al AMP cíclico (AMPc) y se determinó que éste actúa a través dedistintos elementos en cada tipo celular. En las células Hep3B la inducción por AMPcmediada por CRE -170 depende de CCAAT-150, implicando una interacción funcionalentre los factores unidos a ambos sitios. Utilizando un RNA antisentido descubrimos que en células hepáticas ATP-2 es esencial parala activación de la transcripción basal por CRE -l70 y, lo más importante, que la unión de ATP-2 al CRE depende de la integridad de CCAAT -150. Por otro lado, demostramos quela activación de la transcripción por ATP-2 requiere la presencia del núcleo promotor de FNy que la expresión de proteínas activadoras de ATP-2 inhibe la expresión del gen de FN. Ala luz de estos resultados proponemos un modelo en el que un heterodímero entre un factor ATF inducible por AMPc y ATF-2 activa al promotor de FN dentro de un factor compuesto ATP-CCAAT que le confiere a ATP-2 capacidades diferentes a las que posee el factoraislado.
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spelling tesis:tesis_n2968_Pesce2023-10-02T19:43:08Z Múltiples interacciones determinan la participación de ATF-2 en la regulación transcripcional del promotor del gen de la fibronectina humana Multiple interactions determine the involment of ATF-2 in the transcriptional regulation of the human fibronectin gene promoter Pesce, Carlos Gustavo Kornblihtt, Alberto Rodolfo FIBRONECTINA TRANSCRIPCIÓN AMP CÍCLICO RNA ANTISENTIDO CÉLULAS ANTISENTIDO CÉLULAS HEPÁTICAS ATF-2 ELEMENTO CCAAT INTERACCIÓN RPOTEÍNA-PROTEÍNA FIBRONECTIN TRANSCRIPTION CYCLIC AMP ANTISENSE RNA HEPATIC CELLS ATF-2 CCAAT BOX PROTEIN-PROTEIN INTERACTIONS En esta tesis hemos explorado los mecanismos transcripcionales implicados en elfuncionamiento del promotor de gen de la fibronectina humana (FN). En primer lugar seanalizó el impacto de mutaciones en los elementos CRE -170 y CCAAT -150 del promotorsobre la unión de factores de transcripción específicos in vitro y se confirmó la cooperaciónentre los sitios CRE y CCAAT. En segundo lugar el efecto de las mutaciones sobre laactividad del promotor fue analizado en transfecciones transientes en células de hepatomahumano y en líneas celulares fibroblásticas. Estos experimentos demostraron la importanciafuncional de los elementos CRE y CCAAT del promotor de FN y sugirieron la existencia deinteracciones funcionales entre las proteínas que se unen a estos sitios. Se analizó también larespuesta del promotor al AMP cíclico (AMPc) y se determinó que éste actúa a través dedistintos elementos en cada tipo celular. En las células Hep3B la inducción por AMPcmediada por CRE -170 depende de CCAAT-150, implicando una interacción funcionalentre los factores unidos a ambos sitios. Utilizando un RNA antisentido descubrimos que en células hepáticas ATP-2 es esencial parala activación de la transcripción basal por CRE -l70 y, lo más importante, que la unión de ATP-2 al CRE depende de la integridad de CCAAT -150. Por otro lado, demostramos quela activación de la transcripción por ATP-2 requiere la presencia del núcleo promotor de FNy que la expresión de proteínas activadoras de ATP-2 inhibe la expresión del gen de FN. Ala luz de estos resultados proponemos un modelo en el que un heterodímero entre un factor ATF inducible por AMPc y ATF-2 activa al promotor de FN dentro de un factor compuesto ATP-CCAAT que le confiere a ATP-2 capacidades diferentes a las que posee el factoraislado. In this thesis we have explored the transcriptional mechanisms underlying de activity of thehuman fibronectin (FN) gene promoter. First we have analyzed the effects of mutating the -170 CRE and -150 CCAAT elements on the binding of specific transcription factors invitro, confirming the cooperation between the CRE and CCAAT sites. Second, the effect ofthe mutations on the activity of the promoter was investigated in transient transfections inhuman hepatoma cells and in fibroblastic cell lines. These experiments demonstrated thefunctional significance of the CRE and CCAAT elements of the FN promoter and suggestedthe existence of functional interactions between the proteins that bind these sites. Theresponse of the promoter to cyclic AMP (CAMP) was also analyzed and it was shown thatthis molecule acts through different elements in each cell type. In Hep3B cells CAMPinduction going through the -170 CRE depends on -150 CCAAT, implying a functionalinteraction between the factor bound to both sites. Employing an antisense RNA we found that in hepatic cells ATP-2 is essential for -170 CREto activate basal transcription and, most importantly, that the binding of ATP-2 to the CREdepends on the integrity of -150 CCAAT. Besides, we have demonstrated that activation oftranscription by ATP-2 requires the presence of the FN core promoter and that theexpression of ATP-2 activating proteins inhibits FN gene expression. On the light of theseresults we advance a model that depicts a heterodimer between a CAMP responsive ATFfactor and ATP-2 that activates the FN promoter as part of an ATF-CCAAT compositefactor that confers on ATP-2 different abilities compared to the isolated factor. Fil: Pesce, Carlos Gustavo. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales 1997 info:eu-repo/semantics/doctoralThesis info:ar-repo/semantics/tesis doctoral info:eu-repo/semantics/publishedVersion application/pdf spa info:eu-repo/semantics/openAccess https://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/ar https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n2968_Pesce

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