Comparación de métodos para la valoración de fibrinógeno : Aplicación del mét. del biuret a casos normales y patológicos

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Este trabajo se refiere a la determinación cuantitativa del fibrinógenoy está dividido en dos partes, general y experimental. a) Parte general: Se tratan modernos conocimientos sobre la coagulación sanguínea, exponiéndose dose conceptos y esquemas recientes de Quick, Owren y Pavlosky. Luego los cono...

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Autor principal: Gabarain, Roberto Victorio Angel
Otros Autores: Morera, Ventura
Formato: Tesis doctoral publishedVersion
Lenguaje:Español
Publicado: Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales 1957
Acceso en línea:https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n0928_Gabarain
Aporte de:
Biblioteca Digital - Facultad de Ciencias Exactas y Naturales (UBA) de Universidad de Buenos Aires
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En este trabajo se lo aplica para la evaluación de fibrinógeno, siguiendo las indicaciones de un trabajo de los doctores Marenzi y Gómez. El fibrinógeno se precipita con sulfato amónico al 25% en plasma diluídocon solución fisiológica. Luego de quince minutos de reposo se centrifugapor igual lapso y a 3000 r.p.m. Se lava el precipitado con sulfato amónico, centrifugando por dos veces. Luego de efectuar un drenaje del tubo sobre papel de filtro, se disuelve el precipitado en HO.Na al 3 %, calentando ligeramente al baño maría. Se lleva a 9,75 ml con la misma solución alcalina y se agrega 0,25 ml de SO4Cu al 20 %, agitando enérgicamente durante 20 a 30 segundos. Se deja en reposo cinco minutos para luego centrifugar durante veinte minutos a 3000 r.p.m. La lectura se efectúa en fotocolorímetro con filtro de máxima transmisiónen 530 mu. Como blanco de compensación un tubo conteniendo 9,75 ml de HONa al 3% al que se agrega 0,25 ml de SO4Cu 20 %, para después centrifugar en idénticas condiciones. Se estudian en la parte experimental la influencia de las diversas fasesdel trabajo, como ser tiempo de precipitación y minero de lavados. Se realizan también determinaciones por duplicado y triplicado, reacciones de recuperación y un estudio sobre la influencia de la concentración del sulfato amónico. Finalmente se compara valores obtenidos por este método y el de Culleny Van Slyke. Siguen luego las tablas de resultados, dispuestas en cuadros: Cuadro 1- Determinaciones por duplicado y triplicado. Cuadro 2- Influencia del tiempo de precipitación. Cuadro 3- Influencia del número de lavados. Cuadro 4- Reacciones de recuperación. Cuadro 5- Precipitación con distintas concentraciones de SO4(NH4)2. Cuadro 6- Resultados comparativos con respecto al método de Cullen y Van Slyke. Cuadro 7- Fibrinógeno en personas normales. Cuadro 8- Estudio sobre mujeres embarazadas, distribuídas encinco grupos: 1°- 20 embarazadas normales. 2°- 30 embarazadas preeclámpticas. 3°- 30 embarazadas con procesos hemorrágicos diversos. 4°- 4 embarazadas con feto muerto y retenido. 5°- 10 puérperas. Cuadro 9- Estudio sobre personas con diversas afecciones. CONCLUSIONES: PRIMERA PARTE: Estudio del método: I- La determinación del fibrinógeno mediante la reacción de biuret, se efectúa sin inconvenientes y presenta ciertas ventajas con respecto a otros métodos a saber: a) Requiere menos tiempo. b) Permite efectuar simultáneamente un número elevado de determinaciones. c) La preparación y conservación de los testigos colorimétricos no ofrece dificultades. II- El método controlado mediante determinaciones efectuadas por duplicado y triplicado, así como por medio de ensayos de recuperación, dió siempre resultados satisfactorios (CUADROS 1 y 4). Las desviaciones observadas están dentro de límites normales. III- Hemos confirmado que un lapso de quince minutos, una vez agregado sulfato amónico, es suficiente para obtener una completa precipitación defibrinógeno (CUADRO 2). Hemos confirmado que es necesario efectuar un lavado para eliminar restosde otras proteínas. De lo contrario se obtienen valores superioresa los reales. Un mayor número de lavados no influye en las cifras determinadas (CUADRO 3). IV- Hemos estudiado la influencia de las diversas concentraciones de sulfato amónico, llegando a las siguientes conclusiones (CUADRO 5) a) El grado óptimo de saturación es de 25 %. b) Por debajo de estas concentraciones, se obtienensiempre valores inferiores a los reales. c) Por encima de 30 %, se obtienen simpre valoressuperiores a los reales. d) Entre 25 y 30 %, los resultados son variables, a vecespor encima y a veces por debajo de los valores reales. V- Se obtienen valores concordantes al efectuar determinaciones simultáneas por el método propuesto de la reacción del biuret y por el método de Cullen y Van Slyke. SEGUNDA PARTE: El método aplicado a sangres normales y a sangres de personas con diversas afecciones. I- En 20 personas de ambos sexos consideradas normales, el promedio de las determinaciones alcanza a 348 mg %, con un valor máximo de 500 mg % yun mínimo de 220, lo cual coincide con los límites indicados por diversos autores que comprenden entre 200 y 500 mg % (CUADRO 7). II- Se estudió el nivel de fibrinógeno en mujeres embarazadas dividiéndolas en cuatro grupos (CUADRO 8). Primer grupo: en 20 embarazadas normales. Se observa que el fibrinógenoofrece cifras moderadamente elevadas, que se acrecientan con la edad del embarazo. Nuestras cifras son más elevadas que las clásicas. También otros autores, entre ellos, O.Agüero (de Caracas), obtuvieron valores superiores a los clásicos e inclusive, superiores a los nuestros. Segundo grupo: en 30 embarazadas preeclámpticas. Presentan valores moderadamente elevados, similares a los del grupo anterior. No se notaron alteraciones en los demás factores de la coagulación sanguínea. Tercer grupo: embarazadas con procesos acompañados de hemorragias (placenta previa, desprendimiento normoplacentario, mola hidatiforme, amenaza de aborto). Los valores obtenidos son similares a los tres grupos anteriores no variando las cifras de fibrinógeno ni aún después de hemorragias importantes. Cuarto grupo: embarazadas con feto muerto y retenido. Se observanlas cifras de fibrinógeno en relación al desarrollo del embarazo, no variando estas cifras, ni los factores de la coagulación sanguínea en el lapso de dos meses. Quinto grupo: comprende a 10 puérperas. Las pacientes ofrecieron cifrasmás elevadas que las embarazadas, y siempre por encima del límite normal de 500 mg %. III- En pacientes con diversas afecciones observamos (CUADRO 9) a) Cifras normales en diabéticos (salvo uno de ellos) b) Cifras elevadas en los enfermos con diversas infeccionesacompañadas por eritrosedimentación acelerada. c) Cifras limítrofes inferiores en pacientes con afeccioneshepáticas. d) Un caso de púrpura con trombocitopenia sumamente acentuada (28000 trombocitos por mm3), petequias en diversas partes del cuerpo, retracción retardada del coágulo y tiempo de coagulación ligeramente aumentado, acusó cifras normales.
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spelling tesis:tesis_n0928_Gabarain2023-10-02T19:21:22Z Comparación de métodos para la valoración de fibrinógeno : Aplicación del mét. del biuret a casos normales y patológicos Gabarain, Roberto Victorio Angel Morera, Ventura Guerrero, Ariel Heriberto Este trabajo se refiere a la determinación cuantitativa del fibrinógenoy está dividido en dos partes, general y experimental. a) Parte general: Se tratan modernos conocimientos sobre la coagulación sanguínea, exponiéndose dose conceptos y esquemas recientes de Quick, Owren y Pavlosky. Luego los conocimientos modernos con respecto a constitución, propiedades, lugar de formación y variaciones en la concentración, de fibrinógeno. Se exponen también diversos métodos para su valuación como el de Campbell y Hanna, Cullen y Van Slyke, Foster y Whipple y otros. A continuación se considera un trabajo publicado por Robinson y Hogden sobre la reacción del biuret aplicada a la determinación de proteínas y en especial sueroproteínas. b) Parte experimental: Los autores recién mencionados demostraron que el método que aplica lareacción del biuret para la determinación de proteínas sanguíneas ofrece suficientes seguridades. En este trabajo se lo aplica para la evaluación de fibrinógeno, siguiendo las indicaciones de un trabajo de los doctores Marenzi y Gómez. El fibrinógeno se precipita con sulfato amónico al 25% en plasma diluídocon solución fisiológica. Luego de quince minutos de reposo se centrifugapor igual lapso y a 3000 r.p.m. Se lava el precipitado con sulfato amónico, centrifugando por dos veces. Luego de efectuar un drenaje del tubo sobre papel de filtro, se disuelve el precipitado en HO.Na al 3 %, calentando ligeramente al baño maría. Se lleva a 9,75 ml con la misma solución alcalina y se agrega 0,25 ml de SO4Cu al 20 %, agitando enérgicamente durante 20 a 30 segundos. Se deja en reposo cinco minutos para luego centrifugar durante veinte minutos a 3000 r.p.m. La lectura se efectúa en fotocolorímetro con filtro de máxima transmisiónen 530 mu. Como blanco de compensación un tubo conteniendo 9,75 ml de HONa al 3% al que se agrega 0,25 ml de SO4Cu 20 %, para después centrifugar en idénticas condiciones. Se estudian en la parte experimental la influencia de las diversas fasesdel trabajo, como ser tiempo de precipitación y minero de lavados. Se realizan también determinaciones por duplicado y triplicado, reacciones de recuperación y un estudio sobre la influencia de la concentración del sulfato amónico. Finalmente se compara valores obtenidos por este método y el de Culleny Van Slyke. Siguen luego las tablas de resultados, dispuestas en cuadros: Cuadro 1- Determinaciones por duplicado y triplicado. Cuadro 2- Influencia del tiempo de precipitación. Cuadro 3- Influencia del número de lavados. Cuadro 4- Reacciones de recuperación. Cuadro 5- Precipitación con distintas concentraciones de SO4(NH4)2. Cuadro 6- Resultados comparativos con respecto al método de Cullen y Van Slyke. Cuadro 7- Fibrinógeno en personas normales. Cuadro 8- Estudio sobre mujeres embarazadas, distribuídas encinco grupos: 1°- 20 embarazadas normales. 2°- 30 embarazadas preeclámpticas. 3°- 30 embarazadas con procesos hemorrágicos diversos. 4°- 4 embarazadas con feto muerto y retenido. 5°- 10 puérperas. Cuadro 9- Estudio sobre personas con diversas afecciones. CONCLUSIONES: PRIMERA PARTE: Estudio del método: I- La determinación del fibrinógeno mediante la reacción de biuret, se efectúa sin inconvenientes y presenta ciertas ventajas con respecto a otros métodos a saber: a) Requiere menos tiempo. b) Permite efectuar simultáneamente un número elevado de determinaciones. c) La preparación y conservación de los testigos colorimétricos no ofrece dificultades. II- El método controlado mediante determinaciones efectuadas por duplicado y triplicado, así como por medio de ensayos de recuperación, dió siempre resultados satisfactorios (CUADROS 1 y 4). Las desviaciones observadas están dentro de límites normales. III- Hemos confirmado que un lapso de quince minutos, una vez agregado sulfato amónico, es suficiente para obtener una completa precipitación defibrinógeno (CUADRO 2). Hemos confirmado que es necesario efectuar un lavado para eliminar restosde otras proteínas. De lo contrario se obtienen valores superioresa los reales. Un mayor número de lavados no influye en las cifras determinadas (CUADRO 3). IV- Hemos estudiado la influencia de las diversas concentraciones de sulfato amónico, llegando a las siguientes conclusiones (CUADRO 5) a) El grado óptimo de saturación es de 25 %. b) Por debajo de estas concentraciones, se obtienensiempre valores inferiores a los reales. c) Por encima de 30 %, se obtienen simpre valoressuperiores a los reales. d) Entre 25 y 30 %, los resultados son variables, a vecespor encima y a veces por debajo de los valores reales. V- Se obtienen valores concordantes al efectuar determinaciones simultáneas por el método propuesto de la reacción del biuret y por el método de Cullen y Van Slyke. SEGUNDA PARTE: El método aplicado a sangres normales y a sangres de personas con diversas afecciones. I- En 20 personas de ambos sexos consideradas normales, el promedio de las determinaciones alcanza a 348 mg %, con un valor máximo de 500 mg % yun mínimo de 220, lo cual coincide con los límites indicados por diversos autores que comprenden entre 200 y 500 mg % (CUADRO 7). II- Se estudió el nivel de fibrinógeno en mujeres embarazadas dividiéndolas en cuatro grupos (CUADRO 8). Primer grupo: en 20 embarazadas normales. Se observa que el fibrinógenoofrece cifras moderadamente elevadas, que se acrecientan con la edad del embarazo. Nuestras cifras son más elevadas que las clásicas. También otros autores, entre ellos, O.Agüero (de Caracas), obtuvieron valores superiores a los clásicos e inclusive, superiores a los nuestros. Segundo grupo: en 30 embarazadas preeclámpticas. Presentan valores moderadamente elevados, similares a los del grupo anterior. No se notaron alteraciones en los demás factores de la coagulación sanguínea. Tercer grupo: embarazadas con procesos acompañados de hemorragias (placenta previa, desprendimiento normoplacentario, mola hidatiforme, amenaza de aborto). Los valores obtenidos son similares a los tres grupos anteriores no variando las cifras de fibrinógeno ni aún después de hemorragias importantes. Cuarto grupo: embarazadas con feto muerto y retenido. Se observanlas cifras de fibrinógeno en relación al desarrollo del embarazo, no variando estas cifras, ni los factores de la coagulación sanguínea en el lapso de dos meses. Quinto grupo: comprende a 10 puérperas. Las pacientes ofrecieron cifrasmás elevadas que las embarazadas, y siempre por encima del límite normal de 500 mg %. III- En pacientes con diversas afecciones observamos (CUADRO 9) a) Cifras normales en diabéticos (salvo uno de ellos) b) Cifras elevadas en los enfermos con diversas infeccionesacompañadas por eritrosedimentación acelerada. c) Cifras limítrofes inferiores en pacientes con afeccioneshepáticas. d) Un caso de púrpura con trombocitopenia sumamente acentuada (28000 trombocitos por mm3), petequias en diversas partes del cuerpo, retracción retardada del coágulo y tiempo de coagulación ligeramente aumentado, acusó cifras normales. Fil: Gabarain, Roberto Victorio Angel. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina. Universidad de Buenos Aires. 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