Optimización de condiciones experimentales para la identificación del genoma del virus Herpes Simplex Equino 1 y 4 utilizando una reacción seminested
Las pérdidas gestacionales ocasionadas por infecciones virales, bacterianas y fúngicas, tienen una alta prevalencia en la industria hípica, traduciéndose en elevadas pérdidas económicas en los haras de nuestro país. Estos agentes producen brotes enzoóticos por lo que el diagnóstico precoz constit...
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| Autores principales: | , , , , |
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| Formato: | Reunión |
| Lenguaje: | Español |
| Publicado: |
Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Veterinarias
2024
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| Materias: | |
| Acceso en línea: | http://repositorio.unne.edu.ar/handle/123456789/55087 |
| Aporte de: |
| Sumario: | Las pérdidas gestacionales ocasionadas por infecciones virales, bacterianas y fúngicas, tienen una
alta prevalencia en la industria hípica, traduciéndose en elevadas pérdidas económicas en los
haras de nuestro país. Estos agentes producen brotes enzoóticos por lo que el diagnóstico precoz
constituye uno de los pilares para el control de estas enfermedades y es por eso que la utilización
de técnicas diagnósticas rápidas son fundamentales para decidir las medidas profilácticas y
terapéuticas a emplear. Con el objetivo de optimizar las condiciones experimentales para la
identificación del genoma de virus de Herpes Simplex Equino 1 y 4 utilizando una reacción de
cadena de la polimerasa (PCR) seminested. Las reacciones de amplificación fueron llevadas a cabo
con un volumen final de 25pl y contuvieron: 1X de Buffer de PCR, 2,5mM MgCU, 2,0pM de cada
oligonucleótido cebador (HVE-1Fw/ HVE-1Rew para la primer ronda de amplificación y HVE-
1Fw/ HVE-1Rn para la segunda ronda de amplificación para virus de herpes simplex equino 1 y
HVE-4Fw/ HVE-4Rew para la primer ronda de amplificación y HVE-4Fw/ HVE-4Rn para la
segunda ronda de amplificación para virus de herpes simplex equino 4); 200pM de una mezcla
equimolecular de dNTPs, 0,5U de Taq ADN polimerasa. En todos los casos se incorporaron
controles positivos consistentes en ADN de HVE 1 y HVE 4 cedidos gentilmente por el Instituto de
Virología Equina del INTA Castelar y controles negativos consistentes en agua destilada. Las
condiciones térmicas para la amplificación fue idéntica para ambas rondas de amplificación y
ambos tipos virales: desnaturalización inicial: 95°C por 5min, luego 35 ciclos de desnaturalización
a 95°C por 30seg; pegado de primer: 60°C por 30seg; extensión: 72°C por 60seg; extensión final:
72°C por 1min; incubación: 4°C hasta su utilización. Los tamaños de los productos de
amplificación de la primera y segunda ronda fueron fragmentos de 636pb y 287pb para HVE-1 y
de 509 y 323pb para HVE4. Éstos fueron separados y visualizados por electroforesis en gel de
agarosa 2%, teñidos con bromuro de etidio y observados por transiluminación UV. Dada la
elevada sensibilidad y especificidad del método molecular empleado, cuando fueron aplicados a
muestras de control positivos ambas dieron bandas de amplificación detectables del tamaño
esperado, no observándose bandas indicativas de reacciones cruzadas. |
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