Ensayos de liofilización y reconstitución de eritrocitos parasitados con Babesia bovis
Los protozoarios intraeritrocitarios Babesia bovis y B. bigemina son los agentes causales de la babesiosis bovina, una enfermedad transmitida por la garrapata Rhipicephalus microplus que provoca importantes pérdidas económicas en la ganadería de nuestro país. Los métodos actuales de control de la...
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| Formato: | Reunión |
| Lenguaje: | Español |
| Publicado: |
Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Veterinarias
2024
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| Acceso en línea: | http://repositorio.unne.edu.ar/handle/123456789/54986 |
| Aporte de: |
| Sumario: | Los protozoarios intraeritrocitarios Babesia bovis y B. bigemina son los agentes causales de
la babesiosis bovina, una enfermedad transmitida por la garrapata Rhipicephalus microplus que
provoca importantes pérdidas económicas en la ganadería de nuestro país. Los métodos
actuales de control de la enfermedad involucran el tratamiento farmacológico de los animales
afectados, el control de la garrapata por medio de acaricidas y la vacunación con cepas de
Babesia spp. atenuadas en su patogenicidad, que garantizan un estado de fuerte protección
inmunológica. Existen en el mercado dos presentaciones de la vacuna para la profilaxis de esta
enfermedad, fresca y ultracongelada, estas presentan ciertos inconvenientes en lo que
respecta a la aplicación a campo, por lo que resultaría de gran relevancia la obtención de una
tercera presentación en forma liofilizada. De este modo se propone en el presente trabajo
ensayos para la liofilización de uno de los componentes de la vacuna antes mencionada. Para
ello en primer lugar se obtuvo eritrocitos parasitados con Babesia bovis, por medio de cultivos
in vitro, para la formación de un banco de material parasitario “estabilizado”, de propiedades
conocidas: inmunogenicidad, atenuación y transmisibilidad de garrapatas, para su posterior
liofilización. El contenido de una botella de cultivo se centrifugo y el paquete globular fue
mezclado en partes iguales con una solución criopreservadora (PVP al 10% en VyM).A fin de
lograr la deshidratación y posterior reactivación de los eritrocitos parasitados, el material fue
sometido a una curva de congelamiento previamente estandarizada y los viales fueron dejados
en termos de nitrógeno líquido hasta el proceso de liofilización.
Una vez liofilizado, se tomaron 100 pg disolviéndolos en 500 pl de solución VYM, y 10 pl de
Tween 40 (1%). Luego, se cargaron con jeringa de tuberculina, 500 pide adyuvante completo
de Freund (Sigma) y se le agregó a la mezcla anterior de a gotas y agitando con vortex para
que se formara una emulsión homogénea. La que fue posteriormente inoculada en n=4
ratones machos de 4 meses de edad de la cepa BALB/cAn. Cada ratón fue inoculado vía
intraperitoneal con 200 pl de emulsión que contenía 20 pg de liofilizado total. A los 30 días de
la primera inoculación se realizó una segunda, con 500 pl de adyuvante incompleto de Freund,
siguiendo la misma preparación antes mencionada. Se realizaron tres lotes( n=4) de ratones
más a los cuales se les administro solución fisiológica, adyuvante completo e incompleto de
Freud y otro grupo con eritrocitos parasitados con el hemoparásito sin liofilizar y disuelto en los
diluyentes antes mencionados.
Luego de 60 días se obtuvieron muestras de sangre de todos los grupos de ratones y fueron
enviadas al laboratorio de Biotecnología de INTA- Castelar para la titulación de anticuerpos por
técnicas de enzimoinmunoenzayos (ELISA). |
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