Evaluación de un antiveneno botrópico producido por un inmunógeno experimenta
El veneno de B. diporus es altamente proteolítico, hemorrágico, miotóxico y coagulante. Los sueros antiofídicos continúan siendo el único tratamiento frente a las intoxicaciones provocadas por mordeduras de serpientes. Los anticuerpos, que componen el mismo, se obtienen de animales inmunizados pre...
Guardado en:
| Autor principal: | |
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| Formato: | Documento de conferencia |
| Lenguaje: | Español |
| Publicado: |
Universidad Nacional del Nordeste. Secretaría General de Ciencia y Técnica
2023
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| Materias: | |
| Acceso en línea: | http://repositorio.unne.edu.ar/handle/123456789/52848 |
| Aporte de: |
| Sumario: | El veneno de B. diporus es altamente proteolítico, hemorrágico, miotóxico y coagulante. Los sueros antiofídicos continúan siendo el
único tratamiento frente a las intoxicaciones provocadas por mordeduras de serpientes. Los anticuerpos, que componen el mismo, se
obtienen de animales inmunizados previamente con las toxinas del veneno. Las secreciones de serpientes botrópicas, típicamente
hemorrágicas por la presencia de metaloproteinasas (SVMPs) producen daño local en el sitio de la inyección y sistémico, afectando
de esta manera la salud y el bienestar de los animales productores de suero. Con la búsqueda de nuevos inmunobiológicos, de bajo
impacto orgánico, en un trabajo previo, se evaluó como inmunógeno el veneno de B.alternatus bloqueado en sus SVMPs con
EDTA-Na2, eliminándose el excedente del quelante por cromatografía de exclusión molecular. Los resultados mostraron una
adecuada respuesta inmune y reducción del daño local en el animal productor. Este hallazgo generó el interés en realizar un estudio
similar sobre el veneno de B. diporus. Así, se evaluó el efecto in vitro del EDTA-Na2 sobre las enzimas del veneno comprobándose
que el mismo no solo bloquea a las SVMPs, sino que también a otras enzimas (al menos parcialmente). En el presente trabajo se
evaluó la respuesta inmune de animales inoculados con veneno de B. diporus bloqueado con el agente quelante EDTA-Na2. Para
esta propuesta, el veneno de B. diporus (1,9 mg/mL) se pre-incubó con EDTA-Na2 (200 mM) eliminando el excedente del agente
quelante, mediante exclusión molecular (Sephadex G-25), y por el mismo procedimiento cromatografico fue sometido el veneno sin
inhibidor. Las fracciones de interés se recolectaron y reunieron en un pool, denominándolos v.B.d/EDTA y v.B.d respectivamente.
Previo a su uso como inmunógenos, se controló la capacidad bloqueante del EDTA sobre las SVMPs presentes en el pool
v.B.d/EDTA mediante ensayo con azocaseína como sustrato.
El plan de inmunización consistió en dos protocolos, uno de bajas dosis (7-30 µg /ratón) y otro de altas dosis (14-60 µg/ratón) para
cada muestra v.B.d o v.B.d/EDTA. El grupo control recibió solución salina (ss) en el inóculo. La muestra (v.B.d, v.B.d/EDTA ó ss) se
emulsionó con adyuvante Freund completo e inoculó en grupos de 5 ratones (BALB-c) por vía subcutánea, repitiendo el proceso (con
adjuvante incompleto) cada 15 días, en un lapso de 45 días, con dosis crecientes de v.B.d ó v.B.d/EDTA. Previo a cada inoculación
(24 hs) se tomaron muestras de sangre de la punta de la cola de los animales, para análisis por test de ELISA. En el día 45, al
finalizar los planes de inmunización, las muestras de sangre se obtuvieron sin anticoagulante. Los sueros de ratones inmunizados
con las muestras v.B.d, v.B.d/EDTA y solución salina se denominaron anti-v.B.d, anti-v.B.d/EDTA y anti-ss respectivamente. Los
mismos fueron destinados a realizar ensayos de inmunotransferencia (Western Blot), con el fin de evaluar la capacidad en
reconocer los componentes del veneno entero y test de ELISA para cuantificar la respuesta inmune de los animales.
Los resultados obtenidos demostraron que el anti-v.B.d/EDTA presenta capacidad similar a la de anti-v.B.d en reconocer las
principales proteínas de dicha secreción ofidica. El estudio por enzimoinmuno ensayo (ELISA), mostró que el título de anticuerpos
obtenido al finalizar el protocolo de inmunización del anti-v.B.d/EDTA no diferente significativamente (p>0,01) del título que arrojó el
anti-v.B.d. Este resultado deja en evidencia que el EDTA-Na2 no afecta la inmunogenicidad de las proteínas ya que los animales
inmunizados con v.B.d/EDTA responden frente al veneno de B.diporus de modo similar a los animales inmunizados con veneno sin
bloquear.
Futuros estudios podrán completar la potencialidad de este suero murino experimental, ensayando la eficacia y seguridad. Esta línea
de investigación sentará las bases para el diseño de protocolos de inmunización en animales de mayor tamaño (equinos) con el fin
de una potencial transferencia a entidades productoras de inmunobiológicos. |
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