Diagnóstico molecular de Porphyomonas gingivalis : estandarización del método
El objetivo del presente trabajo fue estandarizar y optimizar la técnica de PCR convencional para detección de Porphyromonas gingivalis ATCC 33277. Material y métodos: Las cepa de P. gingivalis ATCC33227 se sembró en agar Bruella enriquecido con sangre de carnero, suplementado con hemina y vitamina...
Guardado en:
| Autores principales: | , , , |
|---|---|
| Formato: | Artículo |
| Lenguaje: | Español |
| Publicado: |
Círculo Argentino de Odontología
2021
|
| Materias: | |
| Acceso en línea: | http://repositorio.unne.edu.ar/handle/123456789/30688 |
| Aporte de: |
| Sumario: | El objetivo del presente trabajo fue estandarizar y optimizar la técnica de PCR convencional para detección de Porphyromonas gingivalis ATCC 33277.
Material y métodos: Las cepa de P. gingivalis ATCC33227 se sembró en agar Bruella enriquecido con sangre de carnero, suplementado con hemina y vitamina K. El ADN se extrajo empleando el protocolo que emplea bromuro de cetil trimetilamonio (CTAB). Se evaluó la cantidad y calidad del material genético obtenido con el fotómetro UV Ampli-Quat, AQ-07 Nucleic Acid.
Se realizó la PCR convencional con diferentes concentraciones de MgCl2 1 mM, 1,5 mM y 2.0 mM y a dos temperaturas de alineamiento: 60°C y 55°C. Los productos PCR se separaron por electroforesis en un gel de agarosa 1% Las bandas se visualizaron en un fotodocumentador.
La sensibilidad se calculó teniendo en cuenta el número de bacterias en diferentes diluciones.
Resultados: Se obtuvo una concentración 1,55x106 ng/ul de DNA genómico a partir de una suspensión bacteriana de 108 células bacterianas/ml, con índice de pureza 1,648 (relación de OD260/OD280). Los mejores resultadosse obtuvieron con una concentración de 2 mM de MgCl2 y una temperatura de alineación de 55°C. En cuanto a la sensibilidad se obtuvo un límite de detección de 5 x 10 / 5 µL células bacterianas en suspensión.
Conclusión: En la prueba de PCR convencional para Porphyromonas gingivalis ATCC 33277, las condiciones óptimas de estandarización son la concentración de 2 mM de MgCl y 55°C y es necesario una carga bacteriana mínima de 5 x 10 células/5 ul como límite de detección. |
|---|