Acción autocrina/paracrina de la inhibina sobre la selección del folículo ovárico

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El objetivo de la presente investigación consistió en evaluar los efectos in vivo e in vitro de la inhibina A recombinante humana durante distintos estadios del desarrollo folicular. En particular se evaluó el efecto de esta glicoproteína sobre la proliferación de células de la granulosa en cultivo,...

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Detalles Bibliográficos
Autor principal: Vitale, Alejandra Mariel
Otros Autores: Tesone, Marta
Formato: Tesis doctoral publishedVersion
Lenguaje:Español
Publicado: Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales 2003
Materias:
OVARIO
FOLICULOGENESIS
APOPTOSIS
INHIBINA
REGULACION INTRAFOLICULAR
OVARY
FOLLICULOGENESIS
INHIBIN
INTRAFOLLICULAR REGULATION
Acceso en línea:https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n3623_Vitale
http://repositoriouba.sisbi.uba.ar/gsdl/cgi-bin/library.cgi?a=d&c=aextesis&d=tesis_n3623_Vitale_oai
Aporte de:
Repositorio Digital de la Universidad de Buenos Aires (UBA) de Universidad de Buenos Aires
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description El objetivo de la presente investigación consistió en evaluar los efectos in vivo e in vitro de la inhibina A recombinante humana durante distintos estadios del desarrollo folicular. En particular se evaluó el efecto de esta glicoproteína sobre la proliferación de células de la granulosa en cultivo, sobre la apoptosis y la expresión de proteínas pro y anti apoptóticas y sobre la esteroidogénesis ovárica en ratas prepúeberes tratadas con DES o con PMSG. Los resultados indican que la inhibina A es producida in vitro por las células de la granulosa en cultivo obtenidas de ovarios de ratas estimuladas con DES y que su producción es estingulada por FSH, TGFβ y estradiol. También se observa que concentraciones fisiológicas de inhibina A disminuyen la proliferación celular inducida por estos tres factores. Además del efecto antiproliferatívo se observa, en este mismo modelo experimental, que la administración de inhibina A in vivo produce un retraso en el desarrollo folicular y un aumento de la apoptosis. Estos hallazgos fueron confirmados por ensayos in vitro donde se observa un aumento significativo de a fragmentación del ADN en folículos antrales tempranos incubados con inhibina A. Con respecto a la expresión de proteínas pro y anti apoptóticas la inhibina A produce tanto in vivo como in vitro un aumento en los niveles de Bax, mientras que los niveles de Bcl-2 permanecen constantes. Por otra parte la inhibina no tiene ningún efecto en la esteroidogénesis. En cuanto a los ensayos realizados con ovarios de ratas estimuladas con PMSG se observó que la inhibina A no tiene efecto alguno sobre la proliferación de células de la granulosa en cultivo. Tampoco se advirtió ningún efecto de esta glicoproteina sobre la fragmentación del ADN en cultivos de folículos preovulatorios. Por otra parte la administración in vivo de inhibina en estas ratas produce un retraso en el desarrollo folicular de folículos inmaduros, pero no tiene ningún efecto en el crecimiento de folículos preovulatorios. Asimismo, en todos los tipos foliculares estudiados se observa una disminución de la apoptosis. Como conclusión, estos resultados sugieren que la inhibina A posee una acción local en el ovario, siendo uno de los factores de acción autocrina o paracrina que regula el crecimiento folicular.
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Además del efecto antiproliferatívo se observa, en este mismo modelo experimental, que la administración de inhibina A in vivo produce un retraso en el desarrollo folicular y un aumento de la apoptosis. Estos hallazgos fueron confirmados por ensayos in vitro donde se observa un aumento significativo de a fragmentación del ADN en folículos antrales tempranos incubados con inhibina A. Con respecto a la expresión de proteínas pro y anti apoptóticas la inhibina A produce tanto in vivo como in vitro un aumento en los niveles de Bax, mientras que los niveles de Bcl-2 permanecen constantes. Por otra parte la inhibina no tiene ningún efecto en la esteroidogénesis. En cuanto a los ensayos realizados con ovarios de ratas estimuladas con PMSG se observó que la inhibina A no tiene efecto alguno sobre la proliferación de células de la granulosa en cultivo. Tampoco se advirtió ningún efecto de esta glicoproteina sobre la fragmentación del ADN en cultivos de folículos preovulatorios. Por otra parte la administración in vivo de inhibina en estas ratas produce un retraso en el desarrollo folicular de folículos inmaduros, pero no tiene ningún efecto en el crecimiento de folículos preovulatorios. Asimismo, en todos los tipos foliculares estudiados se observa una disminución de la apoptosis. Como conclusión, estos resultados sugieren que la inhibina A posee una acción local en el ovario, siendo uno de los factores de acción autocrina o paracrina que regula el crecimiento folicular. The purpose of this study was to evaluate the role of inhibin A in follicular development and apoptosis- related mechanisms, in preantral and early antral follicles from prepubertal DES- treated rats and in preovulatory follicles in PMSG- treated rats. Granulosa cells isolated from the ovaries of 23-25-day-old DES- treated rats were cultured in serum-free medium containing FSH, TGFβ, and estradiol in the presence and absence of different concentratíons of inhibin A. 3H- thymidine incorporation was decreased in the presence of inhibin, while no significant changes were observed in culture media on progesterone and estradiol levels. An increase in low molecular weight DNA fragmentation indicative of apoptosis, and an increase in the protein levels of Bax with no changes in Bcl-2, were evident in early antral follicles incubated 24 h with inhibin. For each animal inhibin (0.5 μg/ovary) was injected intrabursally in one ovary while the contralateral ovary served as control. Ovarian histology revealed an inhibitory effect of inhibin treatment on the follicular development induced by DES. At 24 h of inhibin injection, the number of preantral follicles was increased as compared to controls, whereas the number of early antral follicles was decreased. In addition, in vivo inhibin treatment caused an increase in the percentage of apoptotic cells in preantral, and early antral follicles with a subsequent increase in Bax levels. On the other hand, granulose cells isolated from the ovaries of PMSG- treated rats were cultured in serum- free medium containing FSH, TGFβ, and estradiol in the presence and absence of different concentratíons of inhibin A. 3H- thymidine incorporation was not changed in the presence of inhibin. There were no changes in low molecular weight DNA fragmentation in early antral follicles incubated 24 h with inhibin. For each animal inhibin (0.5 μg/ovary) was injected intrabursally in one ovary while the contralateral ovary served as control. Ovarian histology revealed no effect of inhibin treatment on follicular development of preovulatory follicles induced by PMSG. At 24 h of inhibin injection, the number of preantral follicles was increased as compared to controls, whereas the number of early antral follicles was decreased. There were no changes in the number of preovulatory follicles. In addition, in vivo inhibin treatment caused a decrease in the percentage of apoptotic cells in all kind of follicles. These results suggest that inhibin produced by the dominant follicle may act as a paracrine factor inhibiting the growth of neighboring follicles; thus participating in the mechanism of follicular selection. Fil: Vitale, Alejandra Mariel. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina. application/pdf https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n3623_Vitale spa Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales info:eu-repo/semantics/openAccess https://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/ar OVARIO FOLICULOGENESIS APOPTOSIS INHIBINA REGULACION INTRAFOLICULAR OVARY FOLLICULOGENESIS APOPTOSIS INHIBIN INTRAFOLLICULAR REGULATION Acción autocrina/paracrina de la inhibina sobre la selección del folículo ovárico Inhibin autocrine/paracrine action on ovarian follicular selection info:eu-repo/semantics/doctoralThesis info:ar-repo/semantics/tesis doctoral info:eu-repo/semantics/publishedVersion http://repositoriouba.sisbi.uba.ar/gsdl/cgi-bin/library.cgi?a=d&c=aextesis&d=tesis_n3623_Vitale_oai

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