Caracterización de péptidos de la piel de anfibios de la Patagonia mediante técnicas de biología molecular. Su aplicación como antimicrobianos

The development of multidrug-resistant bacteria represents a threat to health, making the research for new therapeutic agents imperative. Antimicrobial peptides constitute a promising option. This thesis presents the first isolation and characterization of skin peptides from Pleurodema somuncurense...

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Autor principal: Cancelarich, Natalia Lorena
Otros Autores: Basso, Néstor G.
Formato: Tesis doctoral acceptedVersion
Lenguaje:Español
Publicado: Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica 2023
Materias:
Péptidos
Antimicrobianos
Anfibios
Ciencias de la vida
Acceso en línea:http://repositoriouba.sisbi.uba.ar/gsdl/cgi-bin/library.cgi?a=d&c=posgraafa&cl=CL1&d=HWA_7898
https://repositoriouba.sisbi.uba.ar/gsdl/collect/posgraafa/index/assoc/HWA_7898.dir/7898.PDF
Aporte de:
Repositorio Digital de la Universidad de Buenos Aires (UBA) de Universidad de Buenos Aires
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spelling I28-R145-HWA_78982025-11-06 The development of multidrug-resistant bacteria represents a threat to health, making the research for new therapeutic agents imperative. Antimicrobial peptides constitute a promising option. This thesis presents the first isolation and characterization of skin peptides from Pleurodema somuncurense and Odontoprhynus occidentalis. RNA was extracted from the skin, and cDNA were obtained, transfected, and cloned into competent cells. Insert were selected, amplified, and sequenced. Through in silico analysis of the prepro-peptides, certain were selected for Fmoc chemistry synthesis. The peptides were purified by RP-HPLC/MSMS and tested for antimicrobial activity. Three peptides inhibited the growth of E. coli, and one inhibited the growth of S. aureus. Circular dichroism studies showed that two of them adopt ?-helix type structure under specific conditions. Hemolytic activity was determined and one showed low hemolysis percentage at the MIC. The results of several biophysical studies suggest a fusogenic mechanism of action leading to aggregation and alteration of cell morphology. The sequences obtained enrich the databases that serve as a starting point in the design of new therapeutic agents against multidrug-resistant bacteria. Fil: Cancelarich, Natalia Lorena. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Buenos Aires, Argentina Basso, Néstor G. Power, Pablo Marani, Mariela M. Cancelarich, Natalia Lorena 2023-03-14 En esta tesis se identificaron y caracterizaron los péptidos de la piel de Pleurodema somuncurense y Odontoprhynus occidentalis. Se extrajo el ARN de la piel y se obtuvieron los ADNc que se transfectaron y clonaron en células competentes. Se realizó la selección de insertos, amplificación y secuenciación de los mismos. Mediante el análisis in silico de los prepro-péptidos, se seleccionaron algunos péptidos maduros para su síntesis utilizando química Fmoc. Estos se purificaron por RP-HPLC/MSMS y se determinó su actividad antimicrobiana. Tres péptidos inhibieron el crecimiento de E. coli y uno el de S. aureus. Estudios de dicroísmo circular mostraron que dos tienden adoptar una estructura tipo ?-hélice en ciertas condiciones. Los péptidos más activos mostraron un bajo porcentaje de hemólisis a la CIM observada para E. coli. Los resultados de diversos estudios biofísicos sugieren un mecanismo de acción de tipo fusogénico que conduciría a la agregación y alteración de la morfología celular. Las secuencias obtenidas enriquecen las bases de datos que sirven como puntapié inicial en el diseño de agentes terapéuticos. application/pdf Miranda, María Victoria Pérez, Pablo Nusblat, Alejandro Péptidos Antimicrobianos Anfibios spa Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica info:eu-repo/semantics/openAccess http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/2.5/ar/ Ciencias de la vida Doctora de la Universidad de Buenos Aires en Ciencias Biológicas Caracterización de péptidos de la piel de anfibios de la Patagonia mediante técnicas de biología molecular. Su aplicación como antimicrobianos info:eu-repo/semantics/doctoralThesis info:ar-repo/semantics/tesis doctoral info:eu-repo/semantics/acceptedVersion http://repositoriouba.sisbi.uba.ar/gsdl/cgi-bin/library.cgi?a=d&c=posgraafa&cl=CL1&d=HWA_7898 https://repositoriouba.sisbi.uba.ar/gsdl/collect/posgraafa/index/assoc/HWA_7898.dir/7898.PDF
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