Diseño y caracterización de nuevas herramientas para el diagnóstico de la tuberculosis bovina

Bovine tuberculosis is an infectious, contagious, zoonotic, and endemic disease caused by Mycobacterium bovis, which affects cattle. The international reference diagnostic test is the intradermal reaction. The IFN-? test is also employed to improve diagnostic sensitivity. This test detects the in vi...

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Autor principal: Villafañe, Luciana María
Otros Autores: Eirin, María Emilia
Formato: Tesis doctoral acceptedVersion
Lenguaje:Español
Publicado: Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica 2024
Materias:
Mycobacterium bovis
Antígenos
Baculovirus
IGRA
Interferón gamma bovino
Anticuerpos monoclonales
Ciencias de la vida
Acceso en línea:http://repositoriouba.sisbi.uba.ar/gsdl/cgi-bin/library.cgi?a=d&c=posgraafa&cl=CL1&d=HWA_7896
https://repositoriouba.sisbi.uba.ar/gsdl/collect/posgraafa/index/assoc/HWA_7896.dir/7896.PDF
Aporte de:
Repositorio Digital de la Universidad de Buenos Aires (UBA) de Universidad de Buenos Aires
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spelling I28-R145-HWA_78962025-11-06 Bovine tuberculosis is an infectious, contagious, zoonotic, and endemic disease caused by Mycobacterium bovis, which affects cattle. The international reference diagnostic test is the intradermal reaction. The IFN-? test is also employed to improve diagnostic sensitivity. This test detects the in vitro release of IFN-? after stimulation with M. bovis antigens. This research aimed at designing and developing new tools for the differential diagnosis of bovine tuberculosis by identifying new M. bovis antigens and generating anti-bovine IFN-? antibodies. M. bovis proteins were selected using bioinformatics techniques and expressed recombinantly in E. coli and baculovirus to identify new antigens. Subsequently, the proteins were evaluated in IFN-?-release and anti-M. bovis-antibody detection assays. In addition, recombinant bovine IFN-? was produced in E. coli to generate mono and polyclonal antibodies in mice, camelids and birds. PolH-Mb0309, PolH-EsxG, and the BvCk mixture (PolH-ESAT-6/PolH-CFP-10/PolH-Mb3645c) induced differential release of IFN-? in samples from animals sensitized with M. bovis, while His-Mb2002c allowed the detection of anti-M. bovis antibodies. In capture ELISA assays, camelid antibodies were able to identify bovine IFN-? captured. The antigens and antibodies obtained in this study represent progress in the bovine tuberculosis diagnosis optimization. Fil: Villafañe, Luciana María. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Buenos Aires, Argentina Eirin, María Emilia Valdez, Silvina Noemí Forrellad, Marina Andrea Villafañe, Luciana María 2024-10-16 La tuberculosis bovina es una enfermedad infectocontagiosa, zoonótica y endémica en el país causada por Mycobacterium bovis, que afecta al ganado bovino. La prueba diagnóstica de referencia internacional es la intradermorreacción. Para aumentar la sensibilidad diagnóstica, se utiliza complementariamente la prueba de IFN-?, que detecta la liberación in vitro de IFN-? después de la estimulación con antígenos de M. bovis. El objetivo del presente trabajo se centró en diseñar y desarrollar nuevas herramientas para el diagnóstico diferencial de la tuberculosis bovina, mediante la identificación de nuevos antígenos y la generación de anticuerpos anti-IFN-? bovino. Se seleccionaron in silico proteínas de M. bovis y expresaron de forma recombinante en E. coli y baculovirus. Se determinó su capacidad de inducir la liberación de IFN-? y de detección de anticuerpos anti-M. bovis. Además, se generaron anticuerpos mono y policlonales en ratones, camélidos y aves anti-IFN-? bovino. En muestras de animales sensibilizados con M. bovis, las proteínas PolH-Mb0309, PolH-EsxG y la mezcla BvCk (PolH-ESAT-6/PolH-CFP-10/PolH-Mb3645c) indujeron la liberación diferencial de IFN-?, mientras que His-Mb2002c permitió detectar anticuerpos anti-M. bovis. En ensayos de ELISA de captura, los anticuerpos de camélidos demostraron detectar IFN-? bovino capturado. Las antígenos y anticuerpos obtenidos representan un progreso en la optimización del diagnóstico de la tuberculosis bovina. application/pdf Castro, Marisa Mundo, Silvia Canal, Ana Mycobacterium bovis Antígenos Baculovirus IGRA Interferón gamma bovino Anticuerpos monoclonales spa Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica info:eu-repo/semantics/openAccess http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/2.5/ar/ Ciencias de la vida Doctora de la Universidad de Buenos Aires en Ciencias Biológicas Diseño y caracterización de nuevas herramientas para el diagnóstico de la tuberculosis bovina info:eu-repo/semantics/doctoralThesis info:ar-repo/semantics/tesis doctoral info:eu-repo/semantics/acceptedVersion http://repositoriouba.sisbi.uba.ar/gsdl/cgi-bin/library.cgi?a=d&c=posgraafa&cl=CL1&d=HWA_7896 https://repositoriouba.sisbi.uba.ar/gsdl/collect/posgraafa/index/assoc/HWA_7896.dir/7896.PDF
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description Bovine tuberculosis is an infectious, contagious, zoonotic, and endemic disease caused by Mycobacterium bovis, which affects cattle. The international reference diagnostic test is the intradermal reaction. The IFN-? test is also employed to improve diagnostic sensitivity. This test detects the in vitro release of IFN-? after stimulation with M. bovis antigens. This research aimed at designing and developing new tools for the differential diagnosis of bovine tuberculosis by identifying new M. bovis antigens and generating anti-bovine IFN-? antibodies. M. bovis proteins were selected using bioinformatics techniques and expressed recombinantly in E. coli and baculovirus to identify new antigens. Subsequently, the proteins were evaluated in IFN-?-release and anti-M. bovis-antibody detection assays. In addition, recombinant bovine IFN-? was produced in E. coli to generate mono and polyclonal antibodies in mice, camelids and birds. PolH-Mb0309, PolH-EsxG, and the BvCk mixture (PolH-ESAT-6/PolH-CFP-10/PolH-Mb3645c) induced differential release of IFN-? in samples from animals sensitized with M. bovis, while His-Mb2002c allowed the detection of anti-M. bovis antibodies. In capture ELISA assays, camelid antibodies were able to identify bovine IFN-? captured. The antigens and antibodies obtained in this study represent progress in the bovine tuberculosis diagnosis optimization.
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