Inmunomodulación mediada por neutrófilos en la fisiopatología del Síndrome Urémico Hemolítico

Fil: Shiromizu, Carolina Maiumi. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Buenos Aires, Argentina

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Detalles Bibliográficos
Autor principal: Shiromizu, Carolina Maiumi
Otros Autores: Sabbione, Florencia
Formato: Tesis doctoral acceptedVersion
Lenguaje:Español
Publicado: Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica 2024
Materias:
Acceso en línea:http://repositoriouba.sisbi.uba.ar/gsdl/cgi-bin/library.cgi?a=d&c=posgraafa&cl=CL1&d=HWA_7889
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spelling I28-R145-HWA_78892025-11-06 Fil: Shiromizu, Carolina Maiumi. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Buenos Aires, Argentina Sabbione, Florencia Ferrero, Mariana Trevani, Analía Shiromizu, Carolina Maiumi 2024-02-20 Las infecciones producidas por la bacteria Escherichia coli productora de toxina Shiga (STEC) ocurren por consumo de alimentos contaminados o contacto interpersonal. Pueden tener una presentación clínica variada que abarca desde una diarrea autolimitada hasta una condición potencialmente mortal representada por el Síndrome Urémico Hemolítico (SUH). El SUH se caracteriza por la tríada compuesta por anemia hemolítica no inmune, trombocitopenia y falla renal aguda.\nLas STEC son patógenos no invasivos que colonizan el intestino donde liberan su principal factor de virulencia, la toxina Shiga (Stx), que transloca a circulación para llegar a los órganos blanco como el riñón. En sangre periférica, la Stx circula asociada a células sanguíneas y sus vesículas extracelulares (VE), que además se encuentran aumentadas en cantidad en la fase aguda del SUH.\nLos neutrófilos cumplen roles fundamentales en la defensa antibacteriana, pero su activación desmedida puede provocar daño tisular. En la infección por STEC, la neutrofilia es un hallazgo típico y el número elevado de neutrófilos constituye un factor de mal pronóstico. Los mismos son reclutados masivamente al intestino donde contribuyen a la translocación de la Stx a la circulación.\nEste trabajo de tesis tuvo por objetivo general investigar el papel de los neutrófilos en las infecciones por STEC, analizando tanto la respuesta a la bacteria como a la Stx.\nEn una primera parte, mediante ensayos de Western Blot, microscopía láser confocal y análisis de actividad enzimática, determinamos que los neutrófilos humanos altamente purificados liberan VE en respuesta a la estimulación con Stx (VE-Stx), al igual que cuando son incubados con vehículo (VE-C). Empleando bioensayos de citotoxicidad con la línea celular Vero, evidenciamos que las VE-Stx transportan Stx funcional en la superficie y en el interior. A su vez, determinamos que las VE-C son capaces de unir Stx aún en ausencia de células y adquirir capacidad citotóxica. Al cultivar a las VE-Stx con una línea celular de epitelio tubular proximal humano (HK-2) o con células primarias de endotelio glomerular pediátrico humano (CEGH) observamos una masiva internalización de las VE durante las primeras horas de cocultivo. Dicha interacción redujo la capacidad de las células de secretar las citoquinas IL-6 e IL-8 y en células HK-2, la reducción se correlacionó con la inducción de su muerte.\nEn la segunda parte de esta tesis determinamos que el desafío de neutrófilos con STEC conduce a la secreción de IL-1?. Dicha secreción ocurre de manera independiente a la capacidad de la bacteria de secretar la Stx, pero dependiente de otros factores de virulencia presentes en la STEC, ya que una E. coli no patógena fue incapaz de inducir niveles significativos de secreción\nde IL-1?. Mediante el empleo de inhibidores específicos, observamos que la secreción de IL-1? inducida por STEC requiere de la activación del inflamasoma NLRP3 y de la caspasa-1 y la participación de las serinproteasas neutrofílicas.\nEn conjunto, los resultados de este trabajo de tesis sugieren que los neutrófilos podrían contribuir al daño y la alteración de la permeabilidad de la barrera intestinal mediante la secreción de IL-1? y así favorecer la translocación de la Stx a la circulación. Los neutrófilos infiltrantes de la lámina propia, así como los neutrófilos circulantes, en contacto con Stx podrían liberar VE capaces de contribuir a la diseminación sistémica de la Stx y su acceso a las células blanco. Por otro lado, las VE liberadas espontáneamente por los neutrófilos también podrían unir a la Stx translocada y contribuir a su diseminación.\nEstos hallazgos aportan nuevos conocimientos sobre el rol de los neutrófilos y sus VE en la infección por STEC que en su conjunto contribuyen a una mejor comprensión de los mecanismos patológicos involucrados en el SUH. application/pdf Castro, Marisa Chirdo, Fernando González Maglio, Daniel Neutrófilos Vesículas extracelulares Interleuquina-1b Síndrome Urémico Hemolítico STEC Toxina Shiga spa Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica info:eu-repo/semantics/openAccess http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/2.5/ar/ Ciencias de la vida Doctora de la Universidad de Buenos Aires en Ciencias Biológicas Inmunomodulación mediada por neutrófilos en la fisiopatología del Síndrome Urémico Hemolítico info:eu-repo/semantics/doctoralThesis info:ar-repo/semantics/tesis doctoral info:eu-repo/semantics/acceptedVersion http://repositoriouba.sisbi.uba.ar/gsdl/cgi-bin/library.cgi?a=d&c=posgraafa&cl=CL1&d=HWA_7889 https://repositoriouba.sisbi.uba.ar/gsdl/collect/posgraafa/index/assoc/HWA_7889.dir/7889.PDF