Estabilidad catalítica del dominio de unión a ATP de una ATPasa transportadora de Cu(I) del arquea hipertermófila archaeoglobus fulgidus

Stability and catalytic activity of the ATP binding domain of a Cu (I) transport ATPasa from the hyperthermophile archaeal Archaeoglobus fulgidus (Af. CopA). This work aims to establish conditions for the isolated catalytic domain of Af. CopA to catalyze the hydrolysis of ATP and p-nitrophenyl-phosp...

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Autor principal: Martínez, Santiago Agustín
Otros Autores: González Flecha, Francisco Luis
Formato: Tesis doctoral acceptedVersion
Lenguaje:Español
Publicado: Facultad de Farmacia y Bioquímica 2018
Materias:
Actividad enzimétrica
Estabilidad
Estructura
Función
Ciencia de la vida
Acceso en línea:http://repositoriouba.sisbi.uba.ar/gsdl/cgi-bin/library.cgi?a=d&c=posgraafa&cl=CL1&d=HWA_2664
http://repositoriouba.sisbi.uba.ar/gsdl/collect/posgraafa/index/assoc/HWA_2664.dir/2664.PDF
Aporte de:
Repositorio Digital de la Universidad de Buenos Aires (UBA) de Universidad de Buenos Aires
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spelling I28-R145-HWA_26642020-07-05 Stability and catalytic activity of the ATP binding domain of a Cu (I) transport ATPasa from the hyperthermophile archaeal Archaeoglobus fulgidus (Af. CopA). This work aims to establish conditions for the isolated catalytic domain of Af. CopA to catalyze the hydrolysis of ATP and p-nitrophenyl-phosphate. Both activities are modulated by substrates, temperature, pH, Mg+2 y and ionic strength. Mg+2 is an essential activator of both activities. ATP-PN thermal stability was evaluated through the determination of his ATPase activity and structure. We found a high thermal stability at elevated temperatures and suggest at least two intermediaries with considerable amounts of secondary structure and the absence of it in the final thermal inactivation product. ATP-PN unfolding and refolding induced by urea was studied with different spectroscopic techniques, showing a reversible mechanism with at least one reaction intermediary in rapid equilibrium with his native state. ATP-PN net stability was found lower than the usually observed values for mesophilic proteins of similar molecular weight at 25 C. A possible thermal adaptation mechanism involved in ATP-PN is suggested based on his high amounts of secondary structure in his unfolded state, which could explain the lower values of H, S and Cp in contrasts to frequently observed values in mesophilic proteins of similar molecular weight. Fil: Martínez, Santiago Agustín. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Buenos Aires, Argentina Facultad de Farmacia y Bioquímica González Flecha, Francisco Luis Martínez, Santiago Agustín 2018-05-24 Estabilidad y actividad catalítica del dominio de unión a ATP de una ATPasa transportadora de Cu (I) del arquea hipertermófila Archaeoglobus fulgidus (Af. CopA). En este trabajo, se determinaron las condiciones necesarias para las hidrólisis de ATP y p-nitrofenil-fosfato catalizadas por el dominio catalítico asilado (ATP-PN) de Af. CopA. Las actividades catalíticas del ATP-PN son modulables por sus sustratos, la temperatura, el pH, el Mg+2 y la fuerza iónica. El Mg+2 es un activador esencial de ambas actividades. La estabilidad térmica del ATP-PN, fue evaluada monitoreando su actividad y estructura. Este posee una elevada estabilidad en altas temperaturas, presentando al menos dos intermediarios con un elevado contenido de estructura secundaria residual y un producto final de inactivación térmica carente de ella. Se evaluó el desplegado-replegado del ATP-PN inducido por urea mediante diferentes técnicas espectroscópicas, sugiriéndose un mecanismo reversible con al menos un intermediario de reacción en equilibrio rápido en el estado nativo. La estabilidad neta del ATP-PN es inferior a las de proteínas mesófilas de cercano peso molecular a 25 C. Se sugiere un posible mecanismo de adaptación térmica para el ATP-PN en base a la conservación de un alto porcentaje de estructura secundaria en su estado desplegado, el cual justificaría los bajos valores de H, S y Cp respecto de los valores usualmente observados en proteínas mesófilas de similar peso molecular. application/pdf Alleva, Karina Marti, Marcelo Ceccarelli, Eduardo Actividad enzimétrica Estabilidad Estructura Función spa Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica info:eu-repo/semantics/openAccess http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/2.5/ar/ Ciencia de la vida Estabilidad catalítica del dominio de unión a ATP de una ATPasa transportadora de Cu(I) del arquea hipertermófila archaeoglobus fulgidus info:eu-repo/semantics/doctoralThesis info:ar-repo/semantics/tesis doctoral info:eu-repo/semantics/acceptedVersion http://repositoriouba.sisbi.uba.ar/gsdl/cgi-bin/library.cgi?a=d&c=posgraafa&cl=CL1&d=HWA_2664 http://repositoriouba.sisbi.uba.ar/gsdl/collect/posgraafa/index/assoc/HWA_2664.dir/2664.PDF
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