Estudios sobre la proteína 3A en la transcripción/replicación del Virus de la Fiebre Aftosa

Fil: Lotufo, Cecilia Maricel. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Buenos Aires, Argentina

Guardado en:
Detalles Bibliográficos
Autor principal: Lotufo, Cecilia Maricel
Otros Autores: Wilda, Maximiliano
Formato: Tesis doctoral acceptedVersion
Lenguaje:Español
Publicado: Facultad de Farmacia y Bioquímica 2017
Materias:
3A
Acceso en línea:http://repositoriouba.sisbi.uba.ar/gsdl/cgi-bin/library.cgi?a=d&c=posgraafa&cl=CL1&d=HWA_1426
http://repositoriouba.sisbi.uba.ar/gsdl/collect/posgraafa/index/assoc/HWA_1426.dir/1426.PDF
Aporte de:
id I28-R145-HWA_1426
record_format dspace
institution Universidad de Buenos Aires
institution_str I-28
repository_str R-145
collection Repositorio Digital de la Universidad de Buenos Aires (UBA)
language Español
orig_language_str_mv spa
topic ��
3A
Virus de la fiebre aftosa
Replicón
Elisa
Ciencia de la vida
spellingShingle ��
3A
Virus de la fiebre aftosa
Replicón
Elisa
Ciencia de la vida
Lotufo, Cecilia Maricel
Estudios sobre la proteína 3A en la transcripción/replicación del Virus de la Fiebre Aftosa
topic_facet ��
3A
Virus de la fiebre aftosa
Replicón
Elisa
Ciencia de la vida
description Fil: Lotufo, Cecilia Maricel. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Buenos Aires, Argentina
author2 Wilda, Maximiliano
author_facet Wilda, Maximiliano
Lotufo, Cecilia Maricel
format Tesis doctoral
Tesis doctoral
acceptedVersion
author Lotufo, Cecilia Maricel
author_sort Lotufo, Cecilia Maricel
title Estudios sobre la proteína 3A en la transcripción/replicación del Virus de la Fiebre Aftosa
title_short Estudios sobre la proteína 3A en la transcripción/replicación del Virus de la Fiebre Aftosa
title_full Estudios sobre la proteína 3A en la transcripción/replicación del Virus de la Fiebre Aftosa
title_fullStr Estudios sobre la proteína 3A en la transcripción/replicación del Virus de la Fiebre Aftosa
title_full_unstemmed Estudios sobre la proteína 3A en la transcripción/replicación del Virus de la Fiebre Aftosa
title_sort estudios sobre la proteína 3a en la transcripción/replicación del virus de la fiebre aftosa
publisher Facultad de Farmacia y Bioquímica
publishDate 2017
url http://repositoriouba.sisbi.uba.ar/gsdl/cgi-bin/library.cgi?a=d&c=posgraafa&cl=CL1&d=HWA_1426
http://repositoriouba.sisbi.uba.ar/gsdl/collect/posgraafa/index/assoc/HWA_1426.dir/1426.PDF
work_keys_str_mv AT lotufoceciliamaricel estudiossobrelaproteina3aenlatranscripcionreplicaciondelvirusdelafiebreaftosa
_version_ 1766017475017703424
spelling I28-R145-HWA_14262019-09-25 �� Fil: Lotufo, Cecilia Maricel. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Buenos Aires, Argentina Wilda, Maximiliano Facultad de Farmacia y Bioquímica Mattion, Nora Marta Lotufo, Cecilia Maricel 2017-03-10 La Fiebre Aftosa es una enfermedad vesicular aguda de rápida propagación y\namplio rango de huéspedes. El agente etiológico es el virus de la fiebre aftosa (VFA),\nun virus no envuelto con genoma ARN de simple cadena y polaridad positiva,\nperteneciente a la familia Picornaviridae. El genoma del VFA codifica para una\npoliproteína que es escindida por proteasas virales para generar 4 proteínas capsidales y\n8 no capsidales (PNC). Se ha reportado que la proteína NC 3A juega un papel relevante\nen la síntesis del ARN, en el anclaje a membranas intracelulares del complejo\nreplicativo, así como en la virulencia y rango de huésped del VFA. El propósito de este\ntrabajo fue estudiar el rol de la región N-terminal y la propuesta como transmembrana\nde la proteína NC 3A en la replicación del ARN y en su ubicación intracelular.\nLa metodología utilizada fue la evaluación de mutantes puntuales y de deleción\nrealizadas sobre un replicón del VFA (pRep), basado en la cepa O1/Campos, transcripto\ndesde el promotor de la polimerasa del fago T7 (T7pol). Este replicón codifica la región\ncompleta de proteínas NC, y los extremos no traducibles, pero las proteínas capsidales\nfueron reemplazadas por el gen reportero de la Luciferasa de Luciérnaga.\nSe realizaron deleciones sobre pRep en la región N-terminal de 3A (pRep?6-11,\npRep?6-17 y pRep?6-23) y posteriormente mutaciones puntuales (pQ18A/H19A/E20A\ny pE20A). Por otra parte, se mutó la zona predicha como transmembrana (aa 57-76),\nreemplazándola por una secuencia de 8 alaninas (pRep?TM). La evaluación de\nreplicación/transcripción se realizó por medición de luminiscencia, luego de\ntransfección de células BHK-21 con los plásmidos mutantes o controles, junto con los\nplásmidos que expresan T7pol y Luciferasa Renilla, este último para normalizar la\nmedición. Las mutantes pRep?6-23, pQ18A/H19A/E20A, pE20A y pRep?TM\npresentaron una marcada disminución de actividad Luciferasa con respecto a pRep con\n3A wt.\nLa ubicación intracelular se evaluó mediante Inmunofluorescencia Indirecta, por\nmicroscopia de fluorescencia y confocal, utilizando el anticuerpo monoclonal 3H7 y un\nanticuerpo comercial contra la etiqueta Flag. Se construyeron plásmidos de expresión\nde 3Awt (p3AF) y de las mutantes analizadas anteriormente, unidas a la etiqueta Flag\n(p?6-11F, p?6-17F, p?6-23F y p?TMF). Con la mutante p?TMF, se demostró que la\nsecuencia comprendida entre los aa 56 y 76 de la proteína 3A del VFA, estaría\ninvolucrada en la asociación a membranas citoplasmáticas, ya que luego de su deleción\nla proteína se localiza en el núcleo celular.\nSe concluye que la región comprendida entre los aa 18 a 23 de la proteína 3A, en\nespecial el ácido glutámico en la posición 20, serian críticos para la replicación viral,\nmientras que los aa 56 a 76 están involucrados en la ubicación subcelular de la misma.\nComplementariamente, se mapeó el anticuerpo monoclonal 3H7 y se encontró\nque su epitope se ubica en la zona N-terminal de 3A y se desarrolló un ensayo de\nELISA indirecto utilizando la proteína 3A unida a un péptido carrier (3AGFP-ELISA)\npara screening de circulación viral en bovinos.\nEl 3AGFP-ELISA resulto rápido y específico, en la distinción de sueros de\nanimales vacunados, de sueros de animales infectados o convalecientes. Se evaluó su\nperformance en comparación con el ensayo 3ABC-ELISA actualmente en uso,\n(desarrollado también por nuestro Instituto), mediante el análisisde un grupo de 5 sueros\npositivos de referencia fuertes y débiles (cercanos al valor de corte del ensayo) y\nposteriormente el análisis de 363 sueros de animales vacunados/no infectados. Los\nresultados obtenidos con ambos ELISAs 3AGFP y 3ABC mostraron una muy buena\ncorrelación, por lo que 3AGFP-ELISA, se podría proponer como una técnica simple y\nrápida, para el screening inicial de sueros de campo. application/pdf Mbayed, Viviana Bratanich, Ana Glikmann, Graciela 3A Virus de la fiebre aftosa Replicón Elisa spa Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica info:eu-repo/semantics/openAccess http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/2.5/ar/ Ciencia de la vida Estudios sobre la proteína 3A en la transcripción/replicación del Virus de la Fiebre Aftosa info:eu-repo/semantics/doctoralThesis info:ar-repo/semantics/tesis doctoral info:eu-repo/semantics/acceptedVersion http://repositoriouba.sisbi.uba.ar/gsdl/cgi-bin/library.cgi?a=d&c=posgraafa&cl=CL1&d=HWA_1426 http://repositoriouba.sisbi.uba.ar/gsdl/collect/posgraafa/index/assoc/HWA_1426.dir/1426.PDF