Desarrollo de herramientas moleculares para determinar hipoglicosilación de proteínas in vivo en levaduras

During N-glycosylation the endoplasmic reticulum (ER) membrane oligosaccharytransferase complex (OST) transfers Glc3Man9GlcNAc2 from a dolichol-PP donor to the sequence Asn-X-Ser/Thr of proteins that are entering into the ER. The addition of a bulky hydrophilic glycan enhances protein folding effici...

Descripción completa

Guardado en:
Detalles Bibliográficos
Autor principal: Herrera Aguilar, Nathalia
Otros Autores: D´Alessio, Cecilia
Formato: Tesis de maestría acceptedVersion
Lenguaje:Español
Publicado: Facultad de Farmacia y Bioquímica 2014
Materias:
Hipoglicosilación
Bacteriología
Proteínas
Levaduras
Ciencia de la vida
Acceso en línea:http://repositoriouba.sisbi.uba.ar/gsdl/cgi-bin/library.cgi?a=d&c=afamaster&cl=CL1&d=HWA_1228
http://repositoriouba.sisbi.uba.ar/gsdl/collect/afamaster/index/assoc/HWA_1228.dir/1228.PDF
Aporte de:
Repositorio Digital de la Universidad de Buenos Aires (UBA) de Universidad de Buenos Aires
id I28-R145-HWA_1228
record_format dspace
spelling I28-R145-HWA_12282019-09-27 During N-glycosylation the endoplasmic reticulum (ER) membrane oligosaccharytransferase complex (OST) transfers Glc3Man9GlcNAc2 from a dolichol-PP donor to the sequence Asn-X-Ser/Thr of proteins that are entering into the ER. The addition of a bulky hydrophilic glycan enhances protein folding efficiency as it reduces aggregation of folding intermediates. Defects in the glycan transfer reaction due either to OST mutations or to truncated glycan structures built in the Dol-PP may result in protein hypoglycosylation (the N-glycosylation sites that are normally occupied with a glycan are empty) thus causing ubiquitous defects and in human diseases known as congenital disorders of glycosylation type I. It has been recently shown that a GFP variant in which an N-glycosylation site was introduced (GlyGFP) loses its fluorescence when such site is occupied by a glycan. We expressed GFP and GlyGFP variants fused to an N-terminal S. pombe signal peptide and a C-terminal ER retention signal (ER-GFP and ER-GlyGFP), both in a wild type and in a ?alg6 mutant strain in which hypoglycosylation occurs. Our results showed that while expressed ER-GFP fluoresces in the ER of both strains, ER-GlyGFP only fluoresces in the ER of ?alg6 mutant, indicating that the fluorescence intensity of this construction may be used to test the glycoprotein hypoglycosylation in vivo in S. pombe. Fil: Herrera Aguilar, Nathalia. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica; Argentina Facultad de Farmacia y Bioquímica D´Alessio, Cecilia Herrera Aguilar, Nathalia 2014-08-14 Durante el proceso de N-glicosilación de proteínas el complejo oligosacariltransferasa (OST) en la membrana del retículo endoplasmático (RE) transfiere Glc3Man9GlcNAc2 desde el dolicol-PP al residuo Asn de la secuencia Asn-X-Ser/Thr de las proteínas que se están translocando al interior del RE. La adición de un glicano hidrofílico voluminoso mejora la eficiencia del plegamiento de proteínas, ya que reduce la agregación de intermediarios de plegamiento. Los defectos en la reacción de transferencia de glicanos debidos a mutaciones en la OST o a la formación de estructuras de glicanos truncadas sobre el Dol-PP pueden resultar en la hipoglicosilación de proteínas (sitios de N-glicosilación que normalmente están ocupadas con un glicano están vacíos). Esto provoca defectos generales en el plegamiento de glicoproteínas y las enfermedades humanas conocidas como trastornos congénitos de la glicosilación tipo I (CDG I). Se ha demostrado recientemente que una variante de GFP en la que se introdujo un sitio de N-glicosilación (GlyGFP) pierde su fluorescencia cuando dicho sitio está ocupado por un glicano. Hemos expresado GFP y la variante GlyGFP fusionadas en el N-terminal a un de Péptido Señal de S. pombe y en el C-terminal a una señal de retención RE tanto en una cepa de S. pombe salvaje como en una mutante ?alg6, en la que se produce hipoglicosilación de glicoproteínas. Nuestros resultados mostraron que mientras que la ER-GFP emite fluorescencia de en el ER de ambas cepas, ER-GlyGFP sólo emite fluorescencia en el ER de la mutante ?alg6, lo que indica que la intensidad de fluorescencia de esta construcción se puede utilizar para probar la hipoglicosilación de proteínas in vivo en S. pombe. application/pdf Abdian, Patricia Portela, Laura Paveto, Cristina Hipoglicosilación Bacteriología Proteínas Levaduras spa Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica info:eu-repo/semantics/openAccess http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/2.5/ar/(openAccess) Ciencia de la vida Desarrollo de herramientas moleculares para determinar hipoglicosilación de proteínas in vivo en levaduras info:eu-repo/semantics/masterThesis info:ar-repo/semantics/tesis de maestría info:eu-repo/semantics/acceptedVersion http://repositoriouba.sisbi.uba.ar/gsdl/cgi-bin/library.cgi?a=d&c=afamaster&cl=CL1&d=HWA_1228 http://repositoriouba.sisbi.uba.ar/gsdl/collect/afamaster/index/assoc/HWA_1228.dir/1228.PDF
institution Universidad de Buenos Aires
institution_str I-28
repository_str R-145
collection Repositorio Digital de la Universidad de Buenos Aires (UBA)
language Español
orig_language_str_mv spa
topic Hipoglicosilación
Bacteriología
Proteínas
Levaduras
Ciencia de la vida
spellingShingle Hipoglicosilación
Bacteriología
Proteínas
Levaduras
Ciencia de la vida
Herrera Aguilar, Nathalia
Desarrollo de herramientas moleculares para determinar hipoglicosilación de proteínas in vivo en levaduras
topic_facet Hipoglicosilación
Bacteriología
Proteínas
Levaduras
Ciencia de la vida
description During N-glycosylation the endoplasmic reticulum (ER) membrane oligosaccharytransferase complex (OST) transfers Glc3Man9GlcNAc2 from a dolichol-PP donor to the sequence Asn-X-Ser/Thr of proteins that are entering into the ER. The addition of a bulky hydrophilic glycan enhances protein folding efficiency as it reduces aggregation of folding intermediates. Defects in the glycan transfer reaction due either to OST mutations or to truncated glycan structures built in the Dol-PP may result in protein hypoglycosylation (the N-glycosylation sites that are normally occupied with a glycan are empty) thus causing ubiquitous defects and in human diseases known as congenital disorders of glycosylation type I. It has been recently shown that a GFP variant in which an N-glycosylation site was introduced (GlyGFP) loses its fluorescence when such site is occupied by a glycan. We expressed GFP and GlyGFP variants fused to an N-terminal S. pombe signal peptide and a C-terminal ER retention signal (ER-GFP and ER-GlyGFP), both in a wild type and in a ?alg6 mutant strain in which hypoglycosylation occurs. Our results showed that while expressed ER-GFP fluoresces in the ER of both strains, ER-GlyGFP only fluoresces in the ER of ?alg6 mutant, indicating that the fluorescence intensity of this construction may be used to test the glycoprotein hypoglycosylation in vivo in S. pombe.
author2 D´Alessio, Cecilia
author_facet D´Alessio, Cecilia
Herrera Aguilar, Nathalia
format Tesis de maestría
Tesis de maestría
acceptedVersion
author Herrera Aguilar, Nathalia
author_sort Herrera Aguilar, Nathalia
title Desarrollo de herramientas moleculares para determinar hipoglicosilación de proteínas in vivo en levaduras
title_short Desarrollo de herramientas moleculares para determinar hipoglicosilación de proteínas in vivo en levaduras
title_full Desarrollo de herramientas moleculares para determinar hipoglicosilación de proteínas in vivo en levaduras
title_fullStr Desarrollo de herramientas moleculares para determinar hipoglicosilación de proteínas in vivo en levaduras
title_full_unstemmed Desarrollo de herramientas moleculares para determinar hipoglicosilación de proteínas in vivo en levaduras
title_sort desarrollo de herramientas moleculares para determinar hipoglicosilación de proteínas in vivo en levaduras
publisher Facultad de Farmacia y Bioquímica
publishDate 2014
url http://repositoriouba.sisbi.uba.ar/gsdl/cgi-bin/library.cgi?a=d&c=afamaster&cl=CL1&d=HWA_1228
http://repositoriouba.sisbi.uba.ar/gsdl/collect/afamaster/index/assoc/HWA_1228.dir/1228.PDF
work_keys_str_mv AT herreraaguilarnathalia desarrollodeherramientasmolecularesparadeterminarhipoglicosilaciondeproteinasinvivoenlevaduras
_version_ 1766017462349856768

Ejemplares similares