Estudio de la interacción lípido-proteína sobre la función y la organización del receptor de acetilcolina nicotínico en membranas y en sistemas modelos simples
En esta Tesis doctoral se profundizó en el estudio de la interacción lípidoreceptor de acetilcolina nicotínico (AChR) en dos aspectos: por un lado, el mecanismo de inhibición de ácidos grasos libres (AGLs), antagonistas no competitivos del AChR, y por el otro, la ubicación del AChR en dominios lí...
Guardado en:
| Autor principal: | |
|---|---|
| Otros Autores: | |
| Formato: | tesis doctoral |
| Lenguaje: | Español |
| Publicado: |
2014
|
| Materias: | |
| Acceso en línea: | http://repositoriodigital.uns.edu.ar/handle/123456789/542 |
| Aporte de: |
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I20-R126123456789-542 |
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Universidad Nacional del Sur |
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Bioquímica Receptor de acetilcolina nicotínico Interacción lípido-proteína |
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Bioquímica Receptor de acetilcolina nicotínico Interacción lípido-proteína Perillo, Vanesa Liliana Estudio de la interacción lípido-proteína sobre la función y la organización del receptor de acetilcolina nicotínico en membranas y en sistemas modelos simples |
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Bioquímica Receptor de acetilcolina nicotínico Interacción lípido-proteína |
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En esta Tesis doctoral se profundizó en el estudio de la interacción lípidoreceptor
de acetilcolina nicotínico (AChR) en dos aspectos: por un lado, el
mecanismo de inhibición de ácidos grasos libres (AGLs), antagonistas no
competitivos del AChR, y por el otro, la ubicación del AChR en dominios líquidoordenados
(Lo) condicionada por dos características particulares de la membrana.
Con la finalidad de dilucidar el mecanismo de antagonismo de los AGLs sobre
el AChR, se utilizaron AGLs con un doble enlace único en diferentes posiciones de
una cadena acílica de 18 átomos de carbono. Estudios funcionales realizados con la
técnica de patch-clamp han mostrado que solo el cis-6-18:1 y el cis-9-18:1 reducen la
duración del estado de canal abierto del receptor, sugiriendo, por lo tanto, un
mecanismo de bloqueo alostérico del canal. Mediante espectroscopía de fluorescencia
se comprobó que todos los AGLs se ubican en la interfase lípido-AChR, quedando el
cis-6-18:1 restringido a los sitios denominados sitios anulares, mientras que el resto
de los AGLs ocupa también sitios no-anulares. Por otro lado, estudios de polarización
de fluorescencia mostraron que el AGLs cis-9-18:1 es el que ocasiona el mayor
desorden en la membrana. Se comprobó i) que todos los cis-AGLs generan cambios
conformacionales del AChR a nivel transmembrana, ii) que los cis-9-18:1, cis-11-
18:1 y cis-13-18:1 perturban al AChR en su estado de reposo e iii) que los cis-6-18:1
y cis-9-18:1 son los que causan una mayor perturbación del estado desensibilizado.
De esta manera, la posición e isomería del ángulo de torsión de los AGLs insaturados
serían un factor clave en el bloqueo del AChR, sugiriendo entonces que los AGLs con
un único doble enlace y ubicados superficialmente en la membrana inhiben en forma
directa la función del AChR, posiblemente al perturbar una secuencia aminoacídica transmembrana involucrada en los cambios alostéricos necesarios para la apertura del
canal iónico.
Se postula que en la membrana plasmática el AChR se encuentra en dominios
lipídicos denominados “balsas” (“rafts”). Sin embargo, el AChR no muestra
preferencia por dominios Lo en sistemas modelo compuestos por esfingomielina
(SM), colesterol (Col) y POPC (1:1:1), pero sí lo hace un segmento transmembrana
(γM4) que exhibe mayor contacto con los lípidos. Es decir, su distribución no
dependería exclusivamente de sus propiedades intrínsecas sino también de señales
extrínsecas a la proteína. En este trabajo de Tesis se estudió la posible partición
diferencial del AChR en los dominios Lo en dos sistemas modelo diferentes en
función de: a) la presencia de diferentes especies puras de SM en la membrana, y b) la
existencia de asimetría transbicapa en el sistema modelo, mediante el agregado de SM
de cerebro (bSM) en la hemicapa externa. Tanto la existencia de asimetría como la
presencia de 16:0-SM o 18:0-SM, en comparación con las bSM y 24:1-SM, producen
una partición preferencial del AChR en los dominios Lo. De este modo, la localización
del AChR en estos dominios depende no solo de sus propiedades sino también de las
características propias de la membrana en la que se encuentra.
Entender la interacción lípido-AChR es de gran importancia para determinar
tratamientos que puedan mejorar o inhibir la función del AChR y tratar enfermedades
que lo involucren. |
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Antollini, Silvia Susana |
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Antollini, Silvia Susana Perillo, Vanesa Liliana |
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tesis doctoral |
| author |
Perillo, Vanesa Liliana |
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2014 |
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