Aislamiento, purificación y caracterización preliminar de una proteasa de látex de frutos de Morrenia brachystephana Griseb. (Asclepiadaceae)

El látex proveniente de frutos de Morrenia brachystephana Griseb. (Asclepiadaceae) recogido sobre buffer fosfatos 0.1 M (pH 6.9) conteniendo EDTA y cisteína 5 mM y centrifugado a 16.000 x g durante 30 minutos constituye un extracto crudo con actividad proteolítica destacada frente a caseína como sus...

Descripción completa

Detalles Bibliográficos
Autores principales:	Arribére, María Cecilia, Cortadi Adriana A., Bettiol, Marisa P., Priolo de Lufrano, Nora Silvia, Caffini, Néstor Oscar
Formato:	Articulo
Lenguaje:	Inglés
Publicado:	1996
Materias:	Farmacia asclepiadaceae; enzimas; fitoproteasas; látex; morrenia brachystephana asclepiadaceae; enzymes; latex; morrenia brachistephana; plant proteases
Acceso en línea:	http://sedici.unlp.edu.ar/handle/10915/7110 http://www.latamjpharm.org/trabajos/15/3/LAJOP_15_3_1_5_OJX67RVR1O.pdf
Aporte de:	SEDICI (UNLP) de Universidad Nacional de La Plata

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description	El látex proveniente de frutos de Morrenia brachystephana Griseb. (Asclepiadaceae) recogido sobre buffer fosfatos 0.1 M (pH 6.9) conteniendo EDTA y cisteína 5 mM y centrifugado a 16.000 x g durante 30 minutos constituye un extracto crudo con actividad proteolítica destacada frente a caseína como sustrato, en presencia de cisteína 12 mM. La preparación enzimática fue fuerte e irreversiblemente inhibida por muy bajas concentraciones de iodoacetato de sodio (0,0l mM) y de cloruro mercúrico (1 mM) e inhibida en forma parcial y reversible por PMSF 10 mM, sugiriendo que la proteasa pertenece al tipo cisteínico. La actividad caseinolítica resulta máxima a pH alcalino (pH 8,0-10,0). El extracto crudo muestra una notable estabilidad térmica (80% de actividad residual luego de 2 h a 60ºC). Mediante precipitación acetónica fraccionada, seguida de cromatografía de intercambio catiónico (CM Sepharose CL-6B Fast Flow), se obtienen dos fracciones proteolíticamente activas. La fracción principal (II) tiene una masa molecular relativa de 22,l kDa (SDS-PAGE) y un punto isoeléctrico superior a 9,3 (IEF).
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