Análisis de la interacción funcional entre las dos proteínas que unen lípidos coexpresadas en epitelio intestinal

El estudio de los mecanismos moleculares por los cuales se asimilan nutrientes y se regula dicho proceso son temas de alto interés que aún no están completamente entendidos y que tienen gran relevancia para el desarrollo de terapias para enfermedades de relevancia social como la obesidad o la aterog...

Descripción completa

Guardado en:
Detalles Bibliográficos
Autor principal: Apodaca, Sofía
Otros Autores: Falomir Lockhart, Lisandro Jorge
Formato: Tesis Tesis de grado
Lenguaje:Español
Publicado: 2018
Materias:
Acceso en línea:http://sedici.unlp.edu.ar/handle/10915/175725
Aporte de:
id I19-R120-10915-175725
record_format dspace
spelling I19-R120-10915-1757252025-01-27T20:14:37Z http://sedici.unlp.edu.ar/handle/10915/175725 Análisis de la interacción funcional entre las dos proteínas que unen lípidos coexpresadas en epitelio intestinal Apodaca, Sofía 2018-03-27 2018 2025-01-27T17:53:06Z Falomir Lockhart, Lisandro Jorge es Ciencias Exactas Proteínas Lípidos Epitelio El estudio de los mecanismos moleculares por los cuales se asimilan nutrientes y se regula dicho proceso son temas de alto interés que aún no están completamente entendidos y que tienen gran relevancia para el desarrollo de terapias para enfermedades de relevancia social como la obesidad o la aterogénesis y sus complicaciones cardíacas. El objetivo de este trabajo se centró en evaluar la interacción funcional entre las FABP coexpresadas en epitelio intestinal. Para ello se expresaron y purificaron las proteínas recombinantes de rata IFABP y LFABP a partir de bacterias que contenían los plásmidos pET11a-rLFABP o pET11d-rIFABP. Antes de proceder al estudio propuesto propiamente dicho, se realizaron controles estructurales de unión de un análogo fluorescente de ácido graso, comprobándose que las proteínas obtenidas estaban bien plegadas y eran funcionales. Respecto a la interacción directa entre las FABP intestinales, en los ensayos realizados a las distintas concentraciones de proteínas marcadas, no se observó interacción por FRET. Como se mencionó anteriormente, esto no necesariamente significa que no existe interacciones entre estas FABP, sino que puede deberse a que el nivel de marcación (DOL) logrado para cada FABP fue bajo. De hecho, el grado de marcación alcanzado sólo permitiría ver menos del 20 % de las interacciones que se den, lo que nos limita considerablemente la sensibilidad del ensayo. Más aun, es posible que las interacciones que se den entre IFABP y LFABP sean de naturaleza transiente y no duren lo suficiente como para detectarlas por este método. Con el fin de estudiar la interacción transiente pero funcional entre las FABP, se realizaron ensayos de transferencia de ligando entre ellas, y se logró demostrar la transferencia de ligandos entre IFABP y LFABP. Sin embargo, no fue posible evaluar si el mecanismo de transferencia de 12AO era mediado por la disociación del ligando hacia la fase acuosa o si tenía como intermediario la interacción de ambas proteínas en un mecanismo colisional. Esto se debió en parte que fue necesario aplicar ajustes de mayor complejidad, respecto a los estudios clásicos de transferencia a membranas fosfolipídicas, para poder describir satisfactoriamente los procesos que tienen lugar durante la transferencia de ácidos grasos entre IFABP y LFABP. Este procedimiento llevó a contemplar la posibilidad de que coexistan hasta tres procesos independientes, ya sea porque las condiciones iniciales del ensayo no pudieron eliminar o minimizar la posibilidad de que ocurran fenómenos alternativos al que se deseaba estudiar o porque el sistema en realidad es polidisperso y es necesario considerar diferentes configuraciones de unión del 12AO a las FABP, observación que resulta completamente novedosa a la luz de la bibliografía disponible. Para finalizar, vale destacar que el estudio de los mecanismos de absorción de nutrientes y la regulación de su distribución hacia distintos destinos metabólicos es aún un tema de gran interés médico y tecnológico, pero que requiere de gran atención para resolver un gran número de interrogantes que aún no han sido resueltos, dentro de los cuales se encuentra identificar y describir las funciones específicas de las FABP que se coexpresan en niveles relativamente elevados en enterocitos, IFABP y LFABP. Licenciado en Biotecnología y Biología Molecular Universidad Nacional de La Plata Facultad de Ciencias Exactas Tesis Tesis de grado http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/4.0/ Creative Commons Attribution-NonCommercial-ShareAlike 4.0 International (CC BY-NC-SA 4.0) application/pdf
institution Universidad Nacional de La Plata
institution_str I-19
repository_str R-120
collection SEDICI (UNLP)
language Español
topic Ciencias Exactas
Proteínas
Lípidos
Epitelio
spellingShingle Ciencias Exactas
Proteínas
Lípidos
Epitelio
Apodaca, Sofía
Análisis de la interacción funcional entre las dos proteínas que unen lípidos coexpresadas en epitelio intestinal
topic_facet Ciencias Exactas
Proteínas
Lípidos
Epitelio
description El estudio de los mecanismos moleculares por los cuales se asimilan nutrientes y se regula dicho proceso son temas de alto interés que aún no están completamente entendidos y que tienen gran relevancia para el desarrollo de terapias para enfermedades de relevancia social como la obesidad o la aterogénesis y sus complicaciones cardíacas. El objetivo de este trabajo se centró en evaluar la interacción funcional entre las FABP coexpresadas en epitelio intestinal. Para ello se expresaron y purificaron las proteínas recombinantes de rata IFABP y LFABP a partir de bacterias que contenían los plásmidos pET11a-rLFABP o pET11d-rIFABP. Antes de proceder al estudio propuesto propiamente dicho, se realizaron controles estructurales de unión de un análogo fluorescente de ácido graso, comprobándose que las proteínas obtenidas estaban bien plegadas y eran funcionales. Respecto a la interacción directa entre las FABP intestinales, en los ensayos realizados a las distintas concentraciones de proteínas marcadas, no se observó interacción por FRET. Como se mencionó anteriormente, esto no necesariamente significa que no existe interacciones entre estas FABP, sino que puede deberse a que el nivel de marcación (DOL) logrado para cada FABP fue bajo. De hecho, el grado de marcación alcanzado sólo permitiría ver menos del 20 % de las interacciones que se den, lo que nos limita considerablemente la sensibilidad del ensayo. Más aun, es posible que las interacciones que se den entre IFABP y LFABP sean de naturaleza transiente y no duren lo suficiente como para detectarlas por este método. Con el fin de estudiar la interacción transiente pero funcional entre las FABP, se realizaron ensayos de transferencia de ligando entre ellas, y se logró demostrar la transferencia de ligandos entre IFABP y LFABP. Sin embargo, no fue posible evaluar si el mecanismo de transferencia de 12AO era mediado por la disociación del ligando hacia la fase acuosa o si tenía como intermediario la interacción de ambas proteínas en un mecanismo colisional. Esto se debió en parte que fue necesario aplicar ajustes de mayor complejidad, respecto a los estudios clásicos de transferencia a membranas fosfolipídicas, para poder describir satisfactoriamente los procesos que tienen lugar durante la transferencia de ácidos grasos entre IFABP y LFABP. Este procedimiento llevó a contemplar la posibilidad de que coexistan hasta tres procesos independientes, ya sea porque las condiciones iniciales del ensayo no pudieron eliminar o minimizar la posibilidad de que ocurran fenómenos alternativos al que se deseaba estudiar o porque el sistema en realidad es polidisperso y es necesario considerar diferentes configuraciones de unión del 12AO a las FABP, observación que resulta completamente novedosa a la luz de la bibliografía disponible. Para finalizar, vale destacar que el estudio de los mecanismos de absorción de nutrientes y la regulación de su distribución hacia distintos destinos metabólicos es aún un tema de gran interés médico y tecnológico, pero que requiere de gran atención para resolver un gran número de interrogantes que aún no han sido resueltos, dentro de los cuales se encuentra identificar y describir las funciones específicas de las FABP que se coexpresan en niveles relativamente elevados en enterocitos, IFABP y LFABP.
author2 Falomir Lockhart, Lisandro Jorge
author_facet Falomir Lockhart, Lisandro Jorge
Apodaca, Sofía
format Tesis
Tesis de grado
author Apodaca, Sofía
author_sort Apodaca, Sofía
title Análisis de la interacción funcional entre las dos proteínas que unen lípidos coexpresadas en epitelio intestinal
title_short Análisis de la interacción funcional entre las dos proteínas que unen lípidos coexpresadas en epitelio intestinal
title_full Análisis de la interacción funcional entre las dos proteínas que unen lípidos coexpresadas en epitelio intestinal
title_fullStr Análisis de la interacción funcional entre las dos proteínas que unen lípidos coexpresadas en epitelio intestinal
title_full_unstemmed Análisis de la interacción funcional entre las dos proteínas que unen lípidos coexpresadas en epitelio intestinal
title_sort análisis de la interacción funcional entre las dos proteínas que unen lípidos coexpresadas en epitelio intestinal
publishDate 2018
url http://sedici.unlp.edu.ar/handle/10915/175725
work_keys_str_mv AT apodacasofia analisisdelainteraccionfuncionalentrelasdosproteinasqueunenlipidoscoexpresadasenepiteliointestinal
_version_ 1844301421570162688