Expresión génica simultánea y regulada del péptido tímico timulina y la green fluorescent protein utilizando un sistema adenoviral Tet-Off

Introducción: Una de las cuestiones clave en la implementación exitosa de terapias génicas radica en la capacidad de regular la expresión consistentemente. Con este propósito, y a fin de ampliar nuestros estudios en timulina y su papel en el desarrollo del eje hipotálamo-hipófiso-ovárico, construimo...

Descripción completa

Guardado en:
Detalles Bibliográficos
Autores principales: Poch, Brenda, Reggiani, Paula Cecilia
Formato: Objeto de conferencia
Lenguaje:Español
Publicado: 2011
Materias:
Acceso en línea:http://sedici.unlp.edu.ar/handle/10915/151962
Aporte de:
id I19-R120-10915-151962
record_format dspace
spelling I19-R120-10915-1519622023-04-21T20:38:29Z http://sedici.unlp.edu.ar/handle/10915/151962 Expresión génica simultánea y regulada del péptido tímico timulina y la green fluorescent protein utilizando un sistema adenoviral Tet-Off Poch, Brenda Reggiani, Paula Cecilia 2011 2011 2023-04-21T15:12:11Z es Ciencias Médicas Timulina sistema regulable Tet-Off vectores adenovirales recombinantes Introducción: Una de las cuestiones clave en la implementación exitosa de terapias génicas radica en la capacidad de regular la expresión consistentemente. Con este propósito, y a fin de ampliar nuestros estudios en timulina y su papel en el desarrollo del eje hipotálamo-hipófiso-ovárico, construimos un sistema bivectorial regulable Tet-Off que expresa, simultáneamente, los transgenes para green fluorescent protein (GFP) y metFTS (análogo de timulina). Objetivos: Estudiar la funcionalidad y regulabilidad de nuestro sistema in vitro y evaluar la expresión in vivo mediante su inyección en músculos y ventrículos cerebrales de ratas. Materiales y métodos: El sistema experimental consta de dos adenovectores recombinantes (RAd): el RAd-(GFPTRE- FTS)bidir, unidad de respuesta en la cual la transcripción de los transgenes se encuentra controlada por un promotor bidireccional inducible por doxiciclina, y el RAd-tTA, unidad transactivadora que expresa la proteína regulatoria tTA. El sistema control no expresa metFTS. La expresión de GFP se determinó por microscopía y fluorometría. La timulina bioactiva fue medida por un bioensayo de rosetas. Resultados y conclusión: El sistema construido mostró ser activo tanto en experimentos in vitro, donde células CHOK1 incubadas con ambos RAds mostraron una eficiente expresión de los transgenes, pudiendo inhibirse por el agregado de doxiciclina al medio de cultivo; como in vivo, donde se dosaron niveles significativamente aumentados de timulina sérica y en LCR en ratas inyectadas intramuscular e intracerebrovectricularmente con ambos RAds, respectivamente. La utilización del gen de la GFP en nuestro sistema sirvió para comprobar, sencilla y rápidamente, la transcripción del gen de la timulina. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de La Plata Objeto de conferencia Objeto de conferencia http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/4.0/ Creative Commons Attribution-NonCommercial-ShareAlike 4.0 International (CC BY-NC-SA 4.0) application/pdf
institution Universidad Nacional de La Plata
institution_str I-19
repository_str R-120
collection SEDICI (UNLP)
language Español
topic Ciencias Médicas
Timulina
sistema regulable Tet-Off
vectores adenovirales recombinantes
spellingShingle Ciencias Médicas
Timulina
sistema regulable Tet-Off
vectores adenovirales recombinantes
Poch, Brenda
Reggiani, Paula Cecilia
Expresión génica simultánea y regulada del péptido tímico timulina y la green fluorescent protein utilizando un sistema adenoviral Tet-Off
topic_facet Ciencias Médicas
Timulina
sistema regulable Tet-Off
vectores adenovirales recombinantes
description Introducción: Una de las cuestiones clave en la implementación exitosa de terapias génicas radica en la capacidad de regular la expresión consistentemente. Con este propósito, y a fin de ampliar nuestros estudios en timulina y su papel en el desarrollo del eje hipotálamo-hipófiso-ovárico, construimos un sistema bivectorial regulable Tet-Off que expresa, simultáneamente, los transgenes para green fluorescent protein (GFP) y metFTS (análogo de timulina). Objetivos: Estudiar la funcionalidad y regulabilidad de nuestro sistema in vitro y evaluar la expresión in vivo mediante su inyección en músculos y ventrículos cerebrales de ratas. Materiales y métodos: El sistema experimental consta de dos adenovectores recombinantes (RAd): el RAd-(GFPTRE- FTS)bidir, unidad de respuesta en la cual la transcripción de los transgenes se encuentra controlada por un promotor bidireccional inducible por doxiciclina, y el RAd-tTA, unidad transactivadora que expresa la proteína regulatoria tTA. El sistema control no expresa metFTS. La expresión de GFP se determinó por microscopía y fluorometría. La timulina bioactiva fue medida por un bioensayo de rosetas. Resultados y conclusión: El sistema construido mostró ser activo tanto en experimentos in vitro, donde células CHOK1 incubadas con ambos RAds mostraron una eficiente expresión de los transgenes, pudiendo inhibirse por el agregado de doxiciclina al medio de cultivo; como in vivo, donde se dosaron niveles significativamente aumentados de timulina sérica y en LCR en ratas inyectadas intramuscular e intracerebrovectricularmente con ambos RAds, respectivamente. La utilización del gen de la GFP en nuestro sistema sirvió para comprobar, sencilla y rápidamente, la transcripción del gen de la timulina.
format Objeto de conferencia
Objeto de conferencia
author Poch, Brenda
Reggiani, Paula Cecilia
author_facet Poch, Brenda
Reggiani, Paula Cecilia
author_sort Poch, Brenda
title Expresión génica simultánea y regulada del péptido tímico timulina y la green fluorescent protein utilizando un sistema adenoviral Tet-Off
title_short Expresión génica simultánea y regulada del péptido tímico timulina y la green fluorescent protein utilizando un sistema adenoviral Tet-Off
title_full Expresión génica simultánea y regulada del péptido tímico timulina y la green fluorescent protein utilizando un sistema adenoviral Tet-Off
title_fullStr Expresión génica simultánea y regulada del péptido tímico timulina y la green fluorescent protein utilizando un sistema adenoviral Tet-Off
title_full_unstemmed Expresión génica simultánea y regulada del péptido tímico timulina y la green fluorescent protein utilizando un sistema adenoviral Tet-Off
title_sort expresión génica simultánea y regulada del péptido tímico timulina y la green fluorescent protein utilizando un sistema adenoviral tet-off
publishDate 2011
url http://sedici.unlp.edu.ar/handle/10915/151962
work_keys_str_mv AT pochbrenda expresiongenicasimultaneayreguladadelpeptidotimicotimulinaylagreenfluorescentproteinutilizandounsistemaadenoviraltetoff
AT reggianipaulacecilia expresiongenicasimultaneayreguladadelpeptidotimicotimulinaylagreenfluorescentproteinutilizandounsistemaadenoviraltetoff
_version_ 1765660048313286656