Fluorescence Assays for the Study of Mycobacterium tuberculosis Interaction with the Immune Receptor SLAMF1
La evaluación de la interacción directa entre patógenos y receptores inmunitarios suele implicar técnicas sofisticadas o el uso de cepas transgénicas y células modificadas genéticamente. En este trabajo, se describe un método alternativo para detectar la interacción bioquímica entre el sensor microb...
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| Otros Autores: | |
| Formato: | Artículo publishedVersion |
| Lenguaje: | Inglés |
| Publicado: |
Journal of Visualized Experiments
2025
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| Materias: | |
| Acceso en línea: | http://repositorio.unnoba.edu.ar/xmlui/handle/23601/927 |
| Aporte de: |
| Sumario: | La evaluación de la interacción directa entre patógenos y receptores inmunitarios suele implicar técnicas sofisticadas o el uso de cepas transgénicas y células modificadas genéticamente. En este trabajo, se describe un método alternativo para detectar la interacción bioquímica entre el sensor microbiano de macrófagos SLAMF1 y Mycobacterium tuberculosis. Se desarrollaron dos enfoques técnicos que emplean citometría de flujo y microscopía de fluorescencia. Se generaron extractos de proteínas celulares totales de macrófagos humanos, que luego se incubaron con células completas de M. tuberculosis (WCMtb) o antígenos de M. tuberculosis (Ag Mtb) durante la noche a 4 °C y finalmente se entrecruzaron mediante un tratamiento con formaldehído/glicina/etilenglicol bis (succinimidil succinato). La interacción de SLAMF1 con WCMtb mediante citometría de flujo se detectó con un anticuerpo anti-SLAMF1 PE. La existencia de interacción mediante microscopía de fluorescencia se determinó mediante la fijación de Ags de Mtb teñidos con rodamina-PE a cubreobjetos recubiertos con poli-D-lisina, que se incubaron con el extracto proteico total de macrófagos derivados de monocitos. Tras el tratamiento de entrecruzamiento, se visualizó SLAMF1 mediante anticuerpos primarios (anti-SLAMF1) y secundarios (Alexa Fluor 488). Los ensayos proporcionaron una sólida herramienta bioquímica para medir las interacciones patógeno-inmunorreceptor, superando las dificultades asociadas con las líneas celulares transgénicas y los experimentos de modulación de la expresión génica de proteínas. |
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