Identificación y caracterización de nuevos componentes de la exocitosis regulada en Drosophila melanogaster
Las glándulas secretorias se encuentran formadas por células epiteliales especializadas en la síntesis y secreción masiva de proteínas. Estas células, además de llevar a cabo la exocitosis constitutiva de componentes requeridos para la homeostasis celular (componentes de la membrana plasmática y mat...
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| Autor principal: | |
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| Otros Autores: | , , , , |
| Formato: | Tesis Libro |
| Lenguaje: | Español |
| Publicado: |
2019
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| Materias: | |
| Aporte de: | Registro referencial: Solicitar el recurso aquí |
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| 100 | 1 | |a De La Riva Carrasco, Rocío Victoria | |
| 245 | 1 | 0 | |a Identificación y caracterización de nuevos componentes de la exocitosis regulada en Drosophila melanogaster |
| 246 | 3 | 1 | |a Identification and characterization of new components of regulated secretion in Drosophila melanogaster |
| 260 | |c 2019 | ||
| 300 | |a 131 h. : |b il. color, diagrs. color, fotos color, gráfs. color | ||
| 502 | |b Doctor de la Universidad de Buenos Aires en el área de Ciencias Biológicas |c Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales |d 2019-12-12 |g Fundación Instituto Leloir - CONICET. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires (IIBBA) | ||
| 506 | |2 openaire |e Autorización del autor |f info:eu-repo/semantics/closedAccess | ||
| 520 | 3 | |a Las glándulas secretorias se encuentran formadas por células epiteliales especializadas en la síntesis y secreción masiva de proteínas. Estas células, además de llevar a cabo la exocitosis constitutiva de componentes requeridos para la homeostasis celular (componentes de la membrana plasmática y matriz extracelular) presentan la particularidad de realizar exocitosis regulada de uno o algunos pocos componentes proteicos en respuesta a un estímulo determinado. La exocitosis regulada consiste en un tipo de secreción particular donde los gránulos a ser secretados concentran su contenido y se acumulan a la espera de un estímulo. Las glándulas salivales de la larva de Drosophila melanogaster son un excelente modelo para estudiar la exocitosis regulada. Durante el último estadío larval las glándulas salivales sintetizan proteínas altamente glicosiladas (mucinas) que son liberadas por fuera del organismo al momento de la pupariación para permitir a la pupa adherirse al sustrato. Los gránulos secretores (GS) son las organelas encargadas de transportar estas mucinas desde su lugar de síntesis y procesamiento (retículo endoplásmatico / aparato de Golgi) hasta la membrana plasmática, con la cual se fusionan liberando su contenido al espacio extracelular. Los GS emergen de la red trans‐Golgi como pequeñas vesículas inmaduras enriquecidas en estas mucinas. Los GS inmaduros se fusionan entre sí y se recubren de proteínas de membrana de tipo SNARE que serán utilizadas en la fusión con la membrana plasmática. Se conocen al momento algunos componentes moleculares involucrados en la biogénesis y maduración de los GS, y también se ha descripto en detalle los eventos posteriores a la fusión de los GS con la membrana plasmática. Se desconocen, sin embargo, los mecanismos de ejecución y regulación de todas las etapas que ocurren entre la maduración del GS y la exocitosis per se del contenido, a saber: 1) direccionamiento, 2) anclaje, 3) capacitación, 4) gatillaje y 5) fusión del GS con la membrana plasmática. En este trabajo hemos caracterizado la función de la inmunofilina de membrana Zonda en la exocitosis de los GS. Hemos determinado que Zonda es requerido para la exocitosis de los GS, si bien los mismos se forman y maduran correctamente. Específicamente, la falta de Zonda impide la fusión del GS maduro con la membrana plasmática. Esto sugiere que Zonda actúa en alguna de las etapas entre la formación de GS maduros y su contacto con la membrana. Clásicamente, estas funciones son llevadas adelante por proteínas Rabs, el complejo exocisto y SNAREs, cuya función depende de los niveles de Ca++. Por lo tanto, con el objetivo de identificar la etapa en la cual Zonda participa del proceso de exocitosis, interferimos 53 genes candidatos pertenecientes a estas familias de proteínas en Drosophila buscando aquellos que recapitulen la falta de Zonda. Identificamos que la GTPasa pequeña RalA, reguladora del complejo exocisto, muestra el mismo requerimiento que Zonda en la exocitosis de los GS. Además, la sobreexpresión de Zonda rescata el defecto en la exocitosis ocasionado por la falta de RalA. Esto sugiere que Zonda actúa río abajo de RalA. Tanto Zonda como RalA tienen dominios de unión a Calmodulina y, por lo tanto, podrían actuar como los sensores de Ca++ requeridos para el cierre del complejo SNARE y la fusión efectiva de las membranas del GS y plasmática. En el rastrillaje también identificamos genes requeridos para el direccionamiento del GS hacia la membrana plasmática apical (Rab11 y EpsinR) y otros, antes no descriptos en este modelo, requeridos para su biogénesis (CG2023, syx5, syx7 y los componentes del complejo exocisto). |l spa | |
| 520 | 3 | |a Secretory glands are formed by epithelial cells specialized in synthesis and massive protein secretion. These cells, besides carrying out constitutive secretion of components required for cellular homeostasis (components of the plasma membrane and extracellular matrix) possess the peculiarity of implement regulated secretion of one or a few proteins in response to a precise stimulus. Regulated secretion is therefore, a specialized type of exocytosis in which secretory granules (SG) are produced and accumulate, waiting for the right stimulus in order to be released. Salivary glands of Drosophila melanogaster are an excellent model to study regulated secretion. Through the last larval stage, salivary glands synthetize highly glycosylated proteins (mucins) that are released to the outside at pupariation, allowing the organism to adhere to the substrate. The SG emerges from the trans‐Golgi network as small immature vesicles enriched in these mucins. Immature SG emerge from the trans‐Golgi network. Maturation process involves homotypic fusion between SG, SG content condensation and acidification. Currently, several molecular components involved in the biogenesis and maturation of SG are known. Also, it has been described in detail the molecular events that take place after the SG fuse with the plasma membrane. Nevertheless, the mechanisms that regulate SG 1) targeting, 2) docking, 3) priming, 4) triggering and 5) fusion with the plasma membrane remain unknown. In this work we have characterized the function of the membrane immunophilin Zonda in SG exocitosis. We have determined that Zonda is required for the exocitosis of SG, even though the SG are formed and mature correctly. Specifically, lack of Zonda impairs fusion of the mature SG with the plasma membrane. This suggests that Zonda acts after SG biogenesis and maturation, but before SG fusion with the plasma membrane. Classically, these functions are carried out by Rab proteins, exocyst and SNAREs, which their function depends on citosolic increase of Ca++levels. Therefore, aiming to identify the stage in which Zonda participates of the exocytic process, we interfered 53 candidate genes belonging to this protein families searching for the ones that recapitulate the lack of Zonda phenotype. We identified that the small GTPase RalA, regulator of the exocyst, shows the same requirement that Zonda does in SG exocytosis. Besides, overexpression of Zonda rescues the defect generated by the lack of RalA. This suggests that Zonda is required downstream RalA. Both Zonda and RalA have Calmodulin binding domains and thus, they could be acting as sensors of Ca++ required for the closure of the SNARE complex and the effective fusion of the plasma membrane with the SG. In the screen we also identified genes required for the targeting of the SG to the apical plasma membrane (Rab11 y EpsinR) and others, previously not described in this model required for their biogenesis (CG2023, syx5, syx7 and exocyst complex). |l eng | |
| 653 | 1 | 0 | |a TRAFICO VESICULAR |
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| 690 | 1 | 0 | |a DROSOPHILA |
| 690 | 1 | 0 | |a ZONDA |
| 690 | 1 | 0 | |a RALA |
| 700 | 1 | |a Melani, Mariana | |
| 700 | 1 | |a Wappner, Pablo | |
| 700 | 1 | |a Rossi, Mario | |
| 700 | 1 | |a Álvarez Igarzabal, Cecilia Inés | |
| 700 | 1 | |a Pagani, Mario Rafael | |
| 931 | |a FBMC | ||
| 961 | |b tesis |c NP |e ND |a tesis_n6984_delaRivaCarrasco | ||
| 962 | |a info:ar-repo/semantics/tesis doctoral |a info:eu-repo/semantics/doctoralThesis | ||
| 999 | |c 89946 | ||