Rol de TLR9 sobre células T CD4+ y CD8+ en las enfermedades del hígado graso no alcohólico. Potencial de la curcumina como agente profiláctico
Las Enfermedades del Hígado Graso No Alcohólico (HeGNA) constituyen la manifestación hepática del síndrome metabólico. Abarcan la esteatosis hepática simple (ES) y la esteatohepatitis (EH), esta última caracterizada por la presencia de infiltrado inflamatorio en el hígado (linfocitos T (LT), B (LB)...
Guardado en:
| Autor principal: | |
|---|---|
| Otros Autores: | , , , , |
| Formato: | Tesis Libro |
| Lenguaje: | Español |
| Publicado: |
25 de agosto 2023
|
| Materias: | |
| Aporte de: | Registro referencial: Solicitar el recurso aquí |
| LEADER | 14810nam a22005297a 4500 | ||
|---|---|---|---|
| 003 | AR-BaUEN | ||
| 005 | 20250319134913.0 | ||
| 008 | 240807s2023 ag ad||fom||| 000 0|spa d | ||
| 040 | |a AR-BaUEN |b spa |c AR-BaUEN | ||
| 041 | 0 | |b spa |b eng | |
| 044 | |a ag | ||
| 084 | |a QUI 007549 | ||
| 100 | 1 | |a Alegre, Nadia Soledad | |
| 245 | 1 | 0 | |a Rol de TLR9 sobre células T CD4+ y CD8+ en las enfermedades del hígado graso no alcohólico. Potencial de la curcumina como agente profiláctico |
| 246 | 3 | 1 | |a Role of TLR9 on CD4 + and CD8 + T cells in non-alcoholic fatty liver diseases. Potential of curcumin as a prophylactic agent |
| 260 | |c 25 de agosto 2023 | ||
| 300 | |a 153 p. : |b il. (algunas color), gráfs. (algunos color), tablas (algunas color) | ||
| 502 | |b Doctor de la Universidad de Buenos Aires en el área de Química Biológica |c Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales |d 2023-08-25 |g Universidad de Buenos Aires - CONICET. Instituto de Inmunología, Genética y Metabolismo (INIGEM) | ||
| 506 | |2 openaire |f info:eu-repo/semantics/closedAccess | ||
| 518 | |o Fecha de publicación en la Biblioteca Digital FCEN-UBA | ||
| 520 | 3 | |a Las Enfermedades del Hígado Graso No Alcohólico (HeGNA) constituyen la manifestación hepática del síndrome metabólico. Abarcan la esteatosis hepática simple (ES) y la esteatohepatitis (EH), esta última caracterizada por la presencia de infiltrado inflamatorio en el hígado (linfocitos T (LT), B (LB) y macrófagos). Su patogénesis involucra, en parte, la translocación de subproductos microbianos que llegan al hígado a través de la circulación portal, y su impacto en los receptores de reconocimiento de patrones (PRR) presentes en las células inmunes hepáticas, particularmente en los receptores tipo toll (TLR). Dado que la función detoxificadora del hígado se ve vulnerada ante la sobrecarga de lípidos, estos insultos inflamatorios llegan a la circulación general afectando la homeostasis inmunológica sistémica. El daño tisular provocado por la acción del sistema inmune a nivel local y en los órganos metabólicos periféricos, promueve la generación de DAMPs (como ADN mitocondrial), que exacerban el loop inflamatorio. Evidencias previas indican la activación del sistema inmunológico en pacientes y modelos murinos de la patología, y la participación de los receptores tipo toll (TLR) en su progresión, particularmente de TLR9, un PRR que reconoce ADN rico en islas CpG no metiladas característico del ADN bacteriano y el ADN mitocondrial. El objetivo general de este trabajo fue profundizar en el estudio de las alteraciones inmunológicas en LT de pacientes con HeGNA, en función de tres pilares: alteraciones en los porcentajes de LT de memoria central (MC) y memoria efectora (ME), alteraciones en los porcentajes de células T que expresan el receptor de quimiocinas CCR5 (potencial migratorio al hígado); y alteraciones en los porcentajes de LT productores de IFN-γ (células efectoras). Asimismo, caracterizar la expresión de TLR9 en células T y B de pacientes con ES y EH, y las consecuencias funcionales de su activación sobre las alteraciones inmunológicas mencionadas. Finalmente, validar un modelo murino de HeGNA que replique las alteraciones descriptas en humanos, para estudiar si la curcumina (Cur), un polifenol con propiedades antiinflamatorias y antioxidantes, es capaz de prevenir el desarrollo de inflamación mediante la modulación de TLR9 en los LT. Nuestro estudio en humanos incluyó a 35 pacientes con ES, 38 pacientes con EH, 39 pacientes con HeGNA (que cumplían los criterios diagnósticos generales pero carecían de diagnóstico histológico) y 73 sujetos control. Mediante citometría de flujo estudiamos los porcentajes de células T de memoria CCR7+ ó CCR7-, de células T CCR5+ y de células T productoras de IFN-γ. Además, medimos la expresión de TLR9 en LT y LB hepáticos y periféricos. Utilizamos un ligando sintético de TLR9 para coestimular las células T periféricas, medimos CD69 e IFN-γ como marcadores fenotípicos de activación y diferenciación hacia un perfil efector; y la modulación de CCR5 y CCR7. Para el estudio en el modelo murino de HeGNA incluímos 52 ratones jóvenes machos de la cepa C57BL/6J, alimentados con una dieta control (Co,n=25) o una dieta alta en grasa (AG, n=27), durante 4 semanas. Luego, les coadministramos o no Cur durante 21 semanas más, y establecimos 4 grupos dietarios conformados por: 12 Co; 13 Co+Cur, 15 AG y 12 AG+Cur. Analizamos variables morfométricas y bioquímicas relacionadas al desarrollo de HeGNA, y características histológicas asociadas, como el NAFLD Activity Score (NAS) y la fibrosis. Para el estudio de las alteraciones inmunológicas y de la expresión de TLR9 obtuvimos suspensiones de células de hígado y de bazo, este último como representación del compartimiento periférico. Mediante citometría de flujo estudiamos los porcentajes de células T vírgenes y de memoria, y medimos la expresión de TLR9 en LT y LB. En el estudio de las poblaciones de memoria periféricas, se observó un aumento de los porcentajes de células ME en LT CD4+ y CD8+ de individuos con HeGNA. En relación al potencial migratorio de los LT, los pacientes con HeGNA mostraron un aumento significativo del porcentaje de células CD8+ CCR5+. En cuanto a la capacidad efectora, en los pacientes se observó un aumento de las células CD4+ y CD8+ productoras de IFN-γ, perteneciente a los pacientes con EH pero no a los individuos con ES. En el análisis de la expresión proteica de TLR9 en LB y LT CD4+ y CD8+ se observó una marcada disminución de la expresión del receptor en los pacientes con HeGNA en general, y particularmente en los pacientes con ES en ambas subpoblaciones T de periferia y en células CD4+ hepáticas. A su vez, la expresión del receptor mostró correlación con las valoraciones de los parámetros histológicos característicos de las HeGNA. No se observaron diferencias en la población de LB. En línea con estos hallazgos, la coestimulación con el agonista de TLR9 mostró una menor frecuencia de células activadas y un menor porcentaje de LT CD8+ productores de IFN-γ en los pacientes con ES, pero no en los pacientes con EH. Asimismo, la coestimulación con CpG-ODN fue capaz de modular la frecuencia de células CD8+ CCR5+ en pacientes con HeGNA. Las frecuencias de células T CCR7+/CCR7- no fueron moduladas por el agonista. El modelo murino experimental de HeGNA logró replicar la mayoría de las alteraciones metabólicas, bioquímicas e inmunológicas observadas en humanos, incluído el aumento en los porcentajes de células de memoria y la disminución de células vírgenes. La Cur logró prevenirlas. Aunque la dieta AG no modificó los niveles de expresión de TLR9 en ninguna de las poblaciones linfoides evaluadas, una mayor expresión de TLR9 se encontró asociada a los valores más altos de balonamiento y NAS en ambas subpoblaciones de LT esplénicas; mientras que en hígado, una menor expresión del receptor se encontró asociada a valores mayores del score de balonamiento. La Cur moduló positivamente la expresión de TLR9 en los LT intrahepáticos. En base a estos resultados, concluimos que la menor expresión de TLR9 en células T juega un papel protector en pacientes con ES, dado que limita la activación y la producción de IFN-γ por parte de estas células. Este mecanismo protectivo se ve superado en pacientes con EH. Asimismo, la vía de activación de TLR9 parece modular a CCR5 pero no a CCR7, por lo que no estaría involucrada en la transición de células de memoria observada en pacientes, pero sí en el potencial migratorio de los LT. En líneas generales, el modelo murino logró replicar las alteraciones estudiadas en humanos y Cur tendría un efecto preventivo sobre éstas. Habría que profundizar sobre el resultado inesperado de la modulación positiva de TLR9 por parte de Cur en los LT infiltrantes del hígado. |l spa | |
| 520 | 3 | |a Non-Alcoholic Fatty Liver Diseases (NAFLD) is considered the hepatic manifestation of metabolic syndrome. NAFLD encompasses a spectrum of severity, ranging from simple steatosis (SS) to nonalcoholic steatohepatitis (SH), characterized by the presence of an inflammatory infiltrate in the liver (T and B cells and macrophages). Its pathogenesis involves, in part, the translocation of microbial subproducts that reach the liver via the portal circulation, and impact on pattern recognition receptors (PRR) present on hepatic immune cells, particularly on toll-like receptors (TLR). Since the detoxifying function of the liver is impaired by lipid overload, these inflammatory insults reach the general circulation, affecting the systemic immune homeostasis. Tissue damage caused by the action of the immune system at liver and peripheral metabolic organs, promotes the generation of DAMPs (such as mitochondrial DNA), which exacerbate the inflammatory loop. Previous evidence indicates the activation of the immune system in patients and murine models of NAFLD, and the participation of toll-like receptors (TLR) in its progression, particularly TLR9, a PRR that recognizes DNA rich in unmethylated CpG islands, present on bacterial DNA and mitochondrial DNA. The aim of this work was to study the immunological alterations on T cells of NAFLD patients, based on: alterations in the percentages of central memory T cells (CM) and effector memory (EM) T cells, changes on the percentages of T cells expressing CCR5 chemokine receptor (migratory potential to the liver), and alterations on the percentages of IFN-γ producing cells (effector T cells). Besides, to characterize the expression of TLR9 on T and B cells from patients with SS and SH, and its functional consequences on the mentioned immunological alterations. Finally, to validate a murine model of NAFLD that replicates the alterations described in humans to study whether Curcumin (Cur), a polyphenol with anti-inflammatory and antioxidant properties, is capable of preventing the development of inflammation by modulating TLR9 expressed on T and B lymphocytes. The study in humans included 35 patients with SS, 38 patients with SH, 39 NAFLD patients (who met general diagnostic criteria but lacked histological diagnosis) and 73 control subjects. We studied the percentages of CCR7+ or CCR7- memory T cells, CCR5+ T cells, and IFN-γ-producing T cells. In addition, we measured TLR9 expression in hepatic and peripheral T and B cells. We used a synthetic TLR9 ligand to co-stimulate peripheral T cells and then we measured CD69 and IFN-γ as phenotypic markers of activation and effector cells, and the modulation of CCR5 and CCR7. For the study of the murine model of NAFLD we included 52 young male mice of the C57BL/6J strain, fed with a control diet (Co, n=25) or a high-fat diet (HFD, n=27) for 4 weeks. Then, we co-administered Cur for another 21 weeks, and established 4 dietary groups made up of: 12 Co; 13 Co+Cur, 15 AG and 12 AG+Cur. We analyzed morphometric and biochemical variables related to the development of NAFLD, and associated histological features such as the NAFLD Activity Score (NAS) and fibrosis score. For the analysis of the immunological alterations and the expression of TLR9, we obtained liver and spleen cell suspensions, the latter as a representation of the peripheral compartment. Using flow cytometry, we studied the percentages of naïve and memory T cells, and we measured the expression of TLR9 on T and B cells. The analysis of peripheral memory populations from NAFLD patients showed an increased percentage of EM cells CD4+ and CD8+. Relative to the migratory potential of the T cells, NAFLD patients showed a significant increase in the percentage of CD8+ CCR5+ cells. Regarding effector capacity, an increase in IFN-γ-producing CD4+ and CD8+ cells was observed in NAFLD, belonging to patients with SH but not with SS. A notable decrease in TLR9 expression was observed in SS patients for both peripheral T cell subpopulations and for liver CD4+ T cells, whose expression correlated with some histological features of NAFLD. There were no differences in TLR9 expression on B cells. In line with these findings, costimulation with the TLR9 agonist showed a lower frequency of activated T cells and a lower percentage of IFN-γ-producing CD8+ T cells in SS patients, but not in SH patients. Also, costimulation with CpG-ODN was able to modulate the frequency of CD8+ CCR5+ cells in NAFLD patients. CCR7+/CCR7- T cell frequencies were not modulated by the agonist. Murine model of NAFLD managed to replicate most of the metabolic, biochemical and immunological alterations observed in humans, including the increase in the percentages of memory T cells and the decrease in näive T cells. The Cur showed to prevent all these alterations. Although the HFD did not modify TLR9 expression levels in any of the lymphoid populations evaluated, higher TLR9 expression was found to be associated with higher ballooning degeneration and NAS values in both splenic T cell subpopulations, while in liver, a lower TLR9 expression was found associated with higher values of the ballooning score. Cur positively modulated TLR9 expression in intrahepatic T cells. Based on these results, we conclude that the lower expression of TLR9 on T cells plays a protective role in patients with SS, since it limits the activation and production of IFN-γ. This protective mechanism is overcome in SH patients. The TLR9 activation pathway seems to modulate CCR5 but not CCR7, so it would not be involved in the memory cell transition observed in patients, but in the migratory potential of T cells. In general terms, the murine model was able to replicate the alterations studied in humans, and Cur would have a preventive effect on them. The unexpected result of the positive modulation of TLR9 by Cur in liver-infiltrating T cells should be studied in more depth. |l eng | |
| 540 | |2 cc |f https://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/ar | ||
| 653 | 1 | 0 | |a HeGNA |
| 653 | 1 | 0 | |a HIGADO |
| 653 | 1 | 0 | |a INTESTINO |
| 653 | 1 | 0 | |a LINFOCITOS T |
| 653 | 1 | 0 | |a CpG-ODN |
| 653 | 1 | 0 | |a TLR9 |
| 653 | 1 | 0 | |a CURCUMINA |
| 690 | 1 | 0 | |a NAFLD |
| 690 | 1 | 0 | |a LIVER |
| 690 | 1 | 0 | |a INTESTINE |
| 690 | 1 | 0 | |a T LYMPHOCYTES |
| 690 | 1 | 0 | |a CpG-ODN |
| 690 | 1 | 0 | |a TLR9 |
| 690 | 1 | 0 | |a CURCUMIN |
| 700 | 1 | |a Cherñavsky, Alejandra Claudia | |
| 700 | 1 | |a Zwirner, Norberto Walter | |
| 700 | 1 | |a Balboa, Luciana | |
| 700 | 1 | |a Bianciotti, Liliana Graciela | |
| 700 | 1 | |a Valva, Pamela | |
| 856 | 4 | |q application/pdf | |
| 931 | |a DQB | ||
| 961 | |b tesis |c IR |e ND | ||
| 962 | |a info:ar-repo/semantics/tesis doctoral |a info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |b info:eu-repo/semantics/publishedVersion | ||
| 999 | |c 105429 | ||