Clonación de gametas y transgénesis mediada por fertilización in-vitro en bovinos

En la presente tesis se desarrolló un método de clonación del genoma del espermatozoide y del ovocito bovino mediante la producción de embriones androgenéticos y partenogenéticos haploides. . Esta técnica también fue utilizada para generar embriones bovinos que expresan un gen exógeno [transgen] en...

Descripción completa

Guardado en:
Detalles Bibliográficos
Autor principal: Vichera, Gabriel Damián
Otros Autores: Salamone, Daniel Felipe, Radrizzani Helguera, Martín
Formato: Tesis Libro
Lenguaje:Español
Publicado: 2012
Materias:
ADN
Acceso en línea:http://ri.agro.uba.ar/files/intranet/tesis/doctorado/2013vicheragabriel.pdf
Aporte de:Registro referencial: Solicitar el recurso aquí
LEADER 07505ntm a2200913 a 4500
001 BIBUN028191
008 130311s2012 ag ||||| m||| 00| 0 spa d
100 1 |9 34779  |a Vichera, Gabriel Damián 
700 1 |9 61021  |a Salamone, Daniel Felipe 
700 1 |9 58157  |a Radrizzani Helguera, Martín  
245 0 0 |a Clonación de gametas y transgénesis mediada por fertilización in-vitro en bovinos 
502 |a Tesis.  |c Universidad de Buenos Aires. Facultad de Agronomía. Escuela para Graduados.  |b Doctor de la Universidad de Buenos Aires en el área de Ciencias Agropecuarias.  |g Doctorado en Ciencias Agropecuarias.  |d 2012. 
260 |c 2012 
300 |a 172 p.  |b tbls., fot. 
520 |a En la presente tesis se desarrolló un método de clonación del genoma del espermatozoide y del ovocito bovino mediante la producción de embriones androgenéticos y partenogenéticos haploides. . Esta técnica también fue utilizada para generar embriones bovinos que expresan un gen exógeno [transgen] en forma homogénea. . Las tasas de desarrollo de los embriones reconstruídos utilizando genomas espermaticos clonados [blastomeras androgenéticas], alcanzaron 85.1 por ciento de clivaje, 9 por ciento de blastocistos y todos los embriones expresaron el transgen [EGFP] durante el desarrollo in-vitro.. Las tasas de clivaje y de blastocistos de los embriones reconstruídos utilizando genomas clonados de ovocitos [blastomeras partenogenéticas], alcanzaron 78.4 por ciento y 10.8 por ciento respectivamente.. Todos los embriones reconstruidos utilizando blastomeras partenogenéticas que expresaban el transgen mostraron expresión de EGFP y el 96.6 por ciento de ellos en forma homogénea.. Posteriormente se desarrolló un nuevo método de transgenesis que permite transfectar cigotos de fertilización in vitro [FIV] y ovocitos activados partenogeneticamente [AP].. El 70 por ciento de los embriones clivados y el 50 por ciento de los blastocistos expresaron EGFP cuando complejos pCX-EGFP-liposomas fueron inyectados 16 h post-fertilizacion y utilizando una concentración de 500 ng ADN exógeno.ƒÊl.. Al inyectar ovocitos 3 h post-activación partenogénetica se obtuvo una tasa de expresión de 48.4 por ciento.. Por otro lado, evaluamos la incidencia de fragmentación del ADN tras la inyección del transgen, demostrando que su expresión afecta la integridad del ADN en blastocistos bovinos de FIV, pero no así las tasas de desarrollo in vitro.. En resumen, la presente tesis conforma una base sólida para concluir que es posible la clonación de genomas de ovocitos y espermatozoides con capacidad de generar embriones biparentales que evolucionan hasta estadio de blastocisto.. Además, este procedimiento demostró ser una herramienta eficiente para la incorporación de genes exógenos en un embrión.. Finalmente se demostró que la inyección intracitoplasmática de liposomas es una estrategia eficiente para introducir ADN exógeno en embriones de FIV y AP. 
650 0 |a CLONACION  |9 1313 
650 0 |a IN VITRO  |9 10494 
650 0 |a METODOS DE MEJORAMIENTO GENETICO  |9 1200 
650 0 |a ANIMALES TRANSGENICOS  |9 7594 
650 0 |a EMBRIONES ANIMALES  |9 9123 
650 0 |a ADN  |9 249 
856 |x 20130401  |f 2013vicheragabriel  |q application/pdf  |i En reservorio: http://ri.agro.uba.ar/files/intranet/tesis/doctorado/2013vicheragabriel.pdf  |u http://ri.agro.uba.ar/files/intranet/tesis/doctorado/2013vicheragabriel.pdf 
901 |a 29399 
902 |a t 
903 |a 20130311 
903 |a 20130311 
903 |a 20130311 
903 |a 20130318 
904 |a OK 
904 |a DO 
904 |a N 
904 |a Greenstone 
905 |a m 
907 |a TESIS 
908 |a EN LINEA 
908 |a IMPRESO 
924 |a Clonación de gametas y transgénesis mediada por fertilización in-vitro en bovinos  |t Clonación de gametas y transgénesis mediada por fertilización in-vitro en bovinos 
928 |a Vichera  |b Gabriel Damián 
928 |a Salamone  |b Daniel Felipe  |f dir. 
928 |a Radrizzani Helguera  |b Martín  |f cons. 
945 |a 2012 
950 |a es 
965 |a CLONACION 
965 |a IN VITRO 
965 |a METODOS DE MEJORAMIENTO GENETICO 
965 |a ANIMALES TRANSGENICOS 
965 |a EMBRIONES ANIMALES 
965 |a ADN 
969 |a En la presente tesis se desarrolló un método de clonación del genoma del espermatozoide y del ovocito bovino mediante la producción de embriones androgenéticos y partenogenéticos haploides.  
969 |a Esta técnica también fue utilizada para generar embriones bovinos que expresan un gen exógeno [transgen] en forma homogénea.  
969 |a Las tasas de desarrollo de los embriones reconstruídos utilizando genomas espermaticos clonados [blastomeras androgenéticas], alcanzaron 85.1 por ciento de clivaje, 9 por ciento de blastocistos y todos los embriones expresaron el transgen [EGFP] durante el desarrollo in-vitro. 
969 |a Las tasas de clivaje y de blastocistos de los embriones reconstruídos utilizando genomas clonados de ovocitos [blastomeras partenogenéticas], alcanzaron 78.4 por ciento y 10.8 por ciento respectivamente. 
969 |a Todos los embriones reconstruidos utilizando blastomeras partenogenéticas que expresaban el transgen mostraron expresión de EGFP y el 96.6 por ciento de ellos en forma homogénea. 
969 |a Posteriormente se desarrolló un nuevo método de transgenesis que permite transfectar cigotos de fertilización in vitro [FIV] y ovocitos activados partenogeneticamente [AP]. 
969 |a El 70 por ciento de los embriones clivados y el 50 por ciento de los blastocistos expresaron EGFP cuando complejos pCX-EGFP-liposomas fueron inyectados 16 h post-fertilizacion y utilizando una concentración de 500 ng ADN exógeno.ƒÊl. 
969 |a Al inyectar ovocitos 3 h post-activación partenogénetica se obtuvo una tasa de expresión de 48.4 por ciento. 
969 |a Por otro lado, evaluamos la incidencia de fragmentación del ADN tras la inyección del transgen, demostrando que su expresión afecta la integridad del ADN en blastocistos bovinos de FIV, pero no así las tasas de desarrollo in vitro. 
969 |a En resumen, la presente tesis conforma una base sólida para concluir que es posible la clonación de genomas de ovocitos y espermatozoides con capacidad de generar embriones biparentales que evolucionan hasta estadio de blastocisto. 
969 |a Además, este procedimiento demostró ser una herramienta eficiente para la incorporación de genes exógenos en un embrión. 
969 |a Finalmente se demostró que la inyección intracitoplasmática de liposomas es una estrategia eficiente para introducir ADN exógeno en embriones de FIV y AP. 
976 |a AAG 
977 |a 027483s 
984 |a 1 ej. 
985 |a REST 
987 |a AGROVOC 
989 |a 20130401 
993 |a 2013vicheragabriel 
916 |a http://ri.agro.uba.ar/files/intranet/tesis/doctorado/2013vicheragabriel.pdf 
917 |a BP 
917 |a BP 
917 |a BP 
917 |a BP 
915 |e 172 p.  |i tbls., fot. 
955 |a Ciencias Agropecuarias  |c Doctorado en Ciencias Agropecuarias  |d 2012  |e Universidad de Buenos Aires. Facultad de Agronomía. Escuela para Graduados  |g Doctor de la Universidad de Buenos Aires en el área de Ciencias Agropecuarias  |n Tesis  |s UBA.FA 
975 |c T.G.636.2  |l VIC 
942 0 0 |c ENLINEA 
942 0 0 |c TESIP0D 
999 |c 20571  |d 20571 
090 |a T.G.636.2 VIC