Rol de la quinasa de proteínas dependiente de AMPc (PKA) en la diferenciación de Candida albicans : Existencia de una nueva isoenzima de PKA
El objetivo principal de esta Tesis fue profundizar el estudio de losmecanismos bioquímicos involucrados en la transición dimórfica de Candidaalbicans. Este trabajo está basado en resultados previos de nuestro laboratorio en losque se había demostrado que la vía de señalización del AMPc está involuc...
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| Autor principal: | |
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| Otros Autores: | |
| Formato: | Tesis doctoral publishedVersion |
| Lenguaje: | Español |
| Publicado: |
Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales
2000
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| Acceso en línea: | https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n3329_CastillaLozano |
| Aporte de: |
| Sumario: | El objetivo principal de esta Tesis fue profundizar el estudio de losmecanismos bioquímicos involucrados en la transición dimórfica de Candidaalbicans. Este trabajo está basado en resultados previos de nuestro laboratorio en losque se había demostrado que la vía de señalización del AMPc está involucradaen la respuesta del hongo a algunos de los factores ambientales que controlan sumorfología. En consecuencia, continuamos nuestra investigación enfocando elestudio en la participación de la enzima blanco del AMPc, la quinasa de proteínadependiente de AMPc (PKA), en Ia transición levadura —>micelio. Los resultados de los experimentos realizados in vivo con la cepa salvaje 1001 demostraron que: - La inhibición in vivo de la actividad de PKA utilizando inhibidoresespecíficos resultó en un bloqueo completo de la transición dimórfica enmedio mínimo cuando la inducción se llevó a cabo con NAcGlc. Cuando elinductor usado fue suero, la inhibición de la PKA no tuvo un efecto tandrástico. - La inhibición de la PKA no promovió efectos deletéreos en la célula ya queel agregado de suero pudo reiniciar la diferenciación en célulasbloqueadas ni produce efectos generalizados sobre el crecimiento ya quela gemación de las células levaduriformes no fue afectada. - La inhibición de la PKA resultó en un bloqueo generalizado de lafosforilación total de proteínas in vivo. EI agregado de dbAMPc al medioaumentó globalmente la fosforilación de proteínas y aún en su presencia lainhibición de la PKA promueve una desaparición completa de las proteínasfosforiladas. Estos experimentos permiten concluir que la PKA es un elemento crucial enla transducción de señales desencadenadas por NAcGlc y que su ubicación en lacascada de fosforilaciones es tal que controla otras quinasas, algunas de lascuales podrian estar involucradas en el dimorfismo. Los experimentos de germinación realizados con una mutante que carece delgen para la única subunidad catalítica (subunidad C) conocida hasta esemomento (gen TPK2), y los datos aportados por el Proyecto genoma de Candida ,permitieron demostrar la existencia y expresión de un segundo gen para C noconocido. Es más, esta nueva C tiene también un rol positivo en la diferenciación. Demostramos también que la subunidad R es una fosfoproteína in vivo. Laautofosforilación de la subunidad R resultó en una marcada disminución de suafinidad por C Io que hizo a la holoenzima mas sensible a disociación por AMPc. In vivo esta situación permitiría a la holoenzima ser disociada con pequeñasfluctuaciones de AMPc. |
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