Estudio de potenciales marcadores moleculares predictivos de radiosensibilidad en cáncer de piel tipo melanoma.
La radioterapia es un componente esencial en el tratamiento contra el cáncer, el 50% de los pacientes diagnosticados con dicha enfermedad reciben esta terapia al menos una vez durante su tratamiento. La radiosensibilidad individual es un factor determinante en la eficacia de esta modalidad radiotera...
Guardado en:
| Autor principal: | |
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| Formato: | Tesis NonPeerReviewed |
| Lenguaje: | Español |
| Publicado: |
2015
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| Acceso en línea: | http://ricabib.cab.cnea.gov.ar/517/1/1Negrin.pdf |
| Aporte de: |
| Sumario: | La radioterapia es un componente esencial en el tratamiento contra el cáncer, el 50% de los pacientes diagnosticados con dicha enfermedad reciben esta terapia al menos una vez durante su tratamiento. La radiosensibilidad individual es un factor determinante en la eficacia de esta modalidad radioterapéutica siendo responsable de las reacciones adversas y complicaciones que pudieran suceder. El desarrollo de ensayos específicos con potencial diagnóstico que permitan la identificación de la radiosensibilidad de los pacientes permitirá identificar la estrategia terapéutica más apropiada y específica a ser aplicada para cada paciente, contribuyendo a personalizar la terapia radiante.
El objetivo de este trabajo fue estudiar de manera preliminar la respuesta a las radiaciones ionizantes a nivel de la regulación génica relacionada con la radiosensibilidad intrínseca de células de melanoma provenientes de la misma línea celular, A-375 que muestran distinto grado de agresividad, PCDNA3, A7 y G10. Las células A7 son más diferenciadas, presentando mayor grado de polaridad y melanogénesis a diferencia de las células control PCDNA3 que presenta el mismo fenotipo que las células A-375. Por otro lado, las células G10 son apolares e invasivas con respecto a las A7 y al control PCDNA3. El fin último de la serie de trabajos iniciados en esta tesis radica en la posibilidad de detectar potenciales biomarcadores predictivos del comportamiento celular frente a las radiaciones ionizantes.
Se evaluó la fracción de sobrevida de las células de melanoma tratadas con dosis de 1Gy, 2Gy, 3Gy y 5Gy mediante un ensayo clonogenicidad y se estudió la inducción de rupturas de doble cadena de ADN mediante la técnica de inmunocitofluorescencia y cuantificación de γ-H2AX 30 min post-irradiación en células tratadas con dosis de 2 Gy de radiación gamma. Las células de melanoma G10 presentaron mayor resistencia a los efectos citotóxicos de las radiaciones ionizantes que las células PCDNA3 y A7. Estás últimas exhibieron un comportamiento similar de radiosensibilidad. En cuanto al análisis de las rupturas de doble cadena de ADN, se observó un aumento en el número de focos de la histona γ-H2AX en las tres líneas celulares tratadas con 2 Gy de radiación gamma, con mayor inducción de las células A7 y menor inducción en las células G10.
La regulación génica de los procesos implicados en la respuesta a los efectos biológicos de las radiaciones ionizantes se estudió mediante un análisis bioinformático de datos de microarrays obtenidos previamente en el laboratorio. Se comparó la expresión de los genes que participan en los procesos de señalización y reparación de DSB, regulación del ciclo celular, apoptosis y señalización de p53, procesos claves para la viabilidad celular en términos de su capacidad reproductiva.
El análisis de expresión indicó la presencia de 22 genes sub-expresados en la línea G10 que podrían estar implicados en la radiorresistencia que presenta esta línea celular. Dada la importancia de la señalización y reparación de DSB en la respuesta celular radioinducida, y considerando la evidencia bibliográfica encontrada que postula al gen MRE11 como un posible biomarcador de radiosensibilidad, se seleccionó este gen como candidato predictivo a partir del conjunto de genes sub-expresados en G10 para validar su expresión mediante un análisis de PCR real time.
El gen MRE11 es un actor clave en la respuesta al daño del ADN. En este trabajo de tesis se encontró que dicho gen se sub-expresa en la línea G10. También se pudo inferir que la sub-expresión de este gen no es alterada por efecto de las radiaciones ionizantes pero que existe una correlación positiva entre la baja expresión del gen MRE11 y la radiorresistencia en las células de melanoma estudiadas en este trabajo.
Estos resultados permiten disponer de una primera aproximación de la regulación génica de los procesos asociados a la modulación de la radiosensibilidad en células de melanoma, indicando un posible rol del gen MRE11 en la radiorresistencia característica de las células G10. Teniendo en cuenta su función e importancia en la señalización de las rupturas de doble cadena de ADN y la relación directa entre este proceso y los efectos biológicos de las radiaciones ionizantes, surgen de este trabajo premisas para continuar el estudio del gen MRE11 como potencial biomarcador de radiosensibilidad intrínseca. |
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