Regulación de la expresión de proteínas morfogenéticas óseas por el trifosfato de adenosina en osteoblastos de rata pre y post infección con virus de sarampión y Junín : rol de receptores P2 y mecanismos de señalización
El conocimiento de los mecanismos moleculares implicados en la modulación de las funciones biológicas de los osteoblastos, células responsables de la formación de hueso, es indispensable como punto de partida para el diseño de nuevas estrategias terapéuticas aplicables en las patologías óseas. L...
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| Otros Autores: | |
| Formato: | tesis doctoral |
| Lenguaje: | Español |
| Publicado: |
2014
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| Materias: | |
| Acceso en línea: | http://repositoriodigital.uns.edu.ar/handle/123456789/471 |
| Aporte de: |
| Sumario: | El conocimiento de los mecanismos moleculares implicados en la
modulación de las funciones biológicas de los osteoblastos, células
responsables de la formación de hueso, es indispensable como punto de
partida para el diseño de nuevas estrategias terapéuticas aplicables en las
patologías óseas. La acción del trifosfato de adenosina (ATP) sobre los
receptores purinérgicos de la membrana plasmática ha mostrado regular
importantes funciones celulares de los osteoblastos.
Los resultados expuestos en esta Tesis describen por primera vez, el
efecto del ATP sobre la expresión de proteínas inductoras de formación de
hueso en osteoblastos de calvaria de rata (OBCs), como así también la
modulación de dicho suceso por la infección con los virus de Sarampión (MEV)
y Junín (JUNV). Mediante diferentes técnicas, como ensayos de proliferación,
determinación de deposiciones de calcio, citometría de flujo y reacción en
cadena de la polimerasa en tiempo real, se demostró que la activación por ATP
de los receptores P2Y2 estimula la proliferación y diferenciación de los OBCs.
Además, se observó que estos receptores modulan positivamente la expresión
de proteínas asociadas a la diferenciación osteoblástica como las proteínas
morfogenéticas óseas (BMP-2, 4, 5 y 7), sialo-proteína ósea, colágeno y
fosfatasa alcalina. Se demostró la participación de la vía de la fosfatidil inositol
3 quinasa / proteína quinasa B (PI3K/AKT) en la estimulación inducida por el
ATP sobre la proliferación y diferenciación de los OBCs. También, el empleo de
diferentes nucleótidos sugiere que la expresión génica de BMP-1, 3, y 6 estaría
regulada por los subtipos P2Y6, P2Y4,1,12,13 y P2Y6,1,12,13 respectivamente.
Además, por técnicas de microscopía convencional y de fluorescencia, western
blot y ensayos de infectividad, se demostró que MEV o JUNV pueden infectar a
los OBCs y modular la expresión de varias proteínas relacionadas con la
diferenciación de los osteoblastos. La infección con MEV mostró analogía con
datos reportados en la literatura, de biopsias de pacientes con otosclerosis,
enfermedad de los huesecillos del oído que causa sordera. Sin embargo, a
diferencia de lo observado para el tratamiento con ATP, esta modulación no
ocurre a través de la vía PI3K/AKT. La activación de los receptores P2Y1, 12, 13
inhibe la multiplicación o liberación de MEV. En cambio en el caso de los OBCs
infectados con JUNV, los tratamientos con nucleótidos no modificaron los
títulos virales, sin embargo, generaron péptidos truncados derivados de la
nucleoproteína viral característicos de la infección persistente de cultivos
celulares por JUNV. Asimismo, se comprobó la capacidad de JUNV de infectar
persistentemente a los OBCs. Estos resultados permiten especular acerca de
las probables alteraciones inducidas por el virus en la respuesta de los OBCs a
estímulos externos y ubica a estos sistemas virus-célula como modelos de
estudio de enfermedades óseas de probable etiología viral como la
otosclerosis. Los resultados aquí presentados contribuyen a la comprensión de los
mecanismos involucrados en la modulación de la proliferación y maduración de
osteoblastos por receptores purinérgicos y también como respuesta a la
infección viral. |
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