Perfil hidrolítico y aislamiento de los componentes proteolíticos presentes en el látex de frutos de Araujia angustifolia
Se estudiaron las hidrolasas presentes en el látex de Araujia angustifolia (Asclepiadaceae), enredadera que crece en Argentina. El extracto crudo (CE) obtenido por centrifugación diferencial a 8000 y 15000 rpm del látex de frutos de A. angustifolia, recogido en buffer cítrico-citrato 0,05 M (pH 4,5)...
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| Autores principales: | , , , |
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| Formato: | Articulo |
| Lenguaje: | Inglés |
| Publicado: |
2006
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| Materias: | |
| Acceso en línea: | http://sedici.unlp.edu.ar/handle/10915/6821 http://www.latamjpharm.org/trabajos/25/2/LAJOP_25_2_1_7_3O0752U2F6.pdf |
| Aporte de: |
| Sumario: | Se estudiaron las hidrolasas presentes en el látex de Araujia angustifolia (Asclepiadaceae), enredadera que crece en Argentina. El extracto crudo (CE) obtenido por centrifugación diferencial a 8000 y 15000 rpm del látex de frutos de A. angustifolia, recogido en buffer cítrico-citrato 0,05 M (pH 4,5) con EDTA 5 mM, exhibió varias actividades enzimáticas: amidásica con L-piroglutamil-L-fenilalanil-L-leucina-p-nitroanilida (PFLNA) como sustrato; proteolítica sobre caseína al 1% en Tris-HCl pH 8,5; poligalacturonidasa usando ácido poligalacturónico al 1% en buffer acético-acetato pH 4,5; pectín metil esterasa ensayada sobre pectina al 1% en buffer cítrico-fosfato pH 6,8, en presencia de Cl<sub>2</sub>Ca 0,02M y endosterolítica empleando los ésteres p-nitrofenilados de N-α-carbobenzoxi-L-aminoácidos en buffer Tris-HCl. pH 8,0. Dado que la actividad proteolítica fue la principal actividad hidrolítica observada, se determinaron las características proteolíticas del CE, que contiene proteasas de tipo cisteínico: pH óptimo alcalino, punto isoeléctrico (pI) superior a 8,0 y resultan inhibidas por reactivos bloqueantes de grupos tiólicos, tales como iodoacetato y E-64. El CE mostró notable estabilidad térmica. Se detectaron tres proteasas por IEF y zimograma y luego fueron purificadas por FPLC. Las masas moleculares de las mismas fueron del orden de 23 kDa (SDS-PAGE). Las mismas fueron denominadas araujiaína aI, aII y aIII. |
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