Purificación de una nueva endopeptidasa aislada de frutos de <i>Bromelia hieronymi</i> Mez (Bromeliaceae)
Se ha aislado una nueva endopeptidasa a partir de frutos inmaduros de Bromelia hieronymi Mez (Bromeliaceae). Los extractos crudos fueron parcialmente purificados por fraccionamiento con solventes orgánicos, habiéndose obtenido los mejores resultados al precipitar el extracto crudo con 4 volúmenes de...
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| Autores principales: | , , , |
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| Formato: | Articulo |
| Lenguaje: | Inglés |
| Publicado: |
2002
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| Materias: | |
| Acceso en línea: | http://sedici.unlp.edu.ar/handle/10915/6523 http://www.latamjpharm.org/trabajos/21/1/LAJOP_21_1_1_9_02BH3MNM8R.pdf |
| Aporte de: |
| Sumario: | Se ha aislado una nueva endopeptidasa a partir de frutos inmaduros de Bromelia hieronymi Mez (Bromeliaceae). Los extractos crudos fueron parcialmente purificados por fraccionamiento con solventes orgánicos, habiéndose obtenido los mejores resultados al precipitar el extracto crudo con 4 volúmenes de acetona fría (el precipitado retiene el 90% de las proteínas y el 94% de la actividad caseinolítica y contiene sólo 9,9% de azúcares solubles). El precipitado acetónico redisuelto (RAP) mostró máxima actividad (> 80%) a pH 7,3 -10,7 y muestra gran estabilidad térmica (mantiene 80% de actividad residual luego de calentarlo a 60 ºC durante 30 min). Bajas concentraciones de cloruro de sodio (0,2 M) no afectan la actividad caseinolítica, pero ésta disminuye con el incremento de concentración salina (52% de actividad residual cuando la concentración de cloruro de sodio es 2,5M). El RAP demostró poseer actividad coagulante de la leche y notable preferencia por la fracción ê caseína por encima de las as1, as2 y ß caseínas, características que pueden resultar de interés en la industria quesera. La enzima resultó totalmente inhibida por E-64 y ácido iodoacético y activada por cisteína, lo que sugiere que pertenece al grupo de la endopeptidasas cisteínicas, en el que se encuentran todas las proteasas estudiadas de la familia Bromeliaceae. El isoelectroenfoque seguido de zimograma revela la presencia de seis bandas (pI 5,9 a > 9,3), la mayoría de ellas proteolíticamente activas, pero sólo tres (pI 6,4, 8,3 y >9,3) de importancia. Por cromatografía de intercambio catiónico (FPLC) se logró aislar la fracción principal, denominada hieronymina I (pI >9,3 peso molecular 25 kDa). |
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